山地农业生物学报
山地農業生物學報
산지농업생물학보
JOURNAL OF MOUNTAIN AGRICULTURE AND BIOLOGY
2013年
5期
397-402
,共6页
刘建%汤德元%姜德荣%王洪光%李达
劉建%湯德元%薑德榮%王洪光%李達
류건%탕덕원%강덕영%왕홍광%리체
猪细小病毒%NS1基因%主要抗原表位区%原核表达
豬細小病毒%NS1基因%主要抗原錶位區%原覈錶達
저세소병독%NS1기인%주요항원표위구%원핵표체
Porcine parvovirus%NS1 gene%major antigen regions%prokaryotic expression
根据GenBank登录的猪细小病毒NADL-2株和China株NS1基因序列设计1对特异性引物,对贵州大学动物生物技术实验中心分离的猪细小病毒GZ株接种ST细胞传代培养后,提取病毒DNA,进行PCR扩增PPVNS1基因主要抗原表住区,克隆后测序,随后将该基因亚克隆至pET-32a(+)载体,构建pET-32a-NS1重组质粒,转化得到重组菌,经IPTG诱导表达,通过亲和柱纯化并复性,制备重组蛋白.Western-blot检测发现,经诱导表达的NS1基因主要抗原表位区蛋白约为64 ku,与预测的大小一致,而且,重组蛋白在纯化复性后能被PPV阳性血清所识别,具有较好的反应原性.
根據GenBank登錄的豬細小病毒NADL-2株和China株NS1基因序列設計1對特異性引物,對貴州大學動物生物技術實驗中心分離的豬細小病毒GZ株接種ST細胞傳代培養後,提取病毒DNA,進行PCR擴增PPVNS1基因主要抗原錶住區,剋隆後測序,隨後將該基因亞剋隆至pET-32a(+)載體,構建pET-32a-NS1重組質粒,轉化得到重組菌,經IPTG誘導錶達,通過親和柱純化併複性,製備重組蛋白.Western-blot檢測髮現,經誘導錶達的NS1基因主要抗原錶位區蛋白約為64 ku,與預測的大小一緻,而且,重組蛋白在純化複性後能被PPV暘性血清所識彆,具有較好的反應原性.
근거GenBank등록적저세소병독NADL-2주화China주NS1기인서렬설계1대특이성인물,대귀주대학동물생물기술실험중심분리적저세소병독GZ주접충ST세포전대배양후,제취병독DNA,진행PCR확증PPVNS1기인주요항원표주구,극륭후측서,수후장해기인아극륭지pET-32a(+)재체,구건pET-32a-NS1중조질립,전화득도중조균,경IPTG유도표체,통과친화주순화병복성,제비중조단백.Western-blot검측발현,경유도표체적NS1기인주요항원표위구단백약위64 ku,여예측적대소일치,이차,중조단백재순화복성후능피PPV양성혈청소식별,구유교호적반응원성.
