CAJ | 학술논문

目的与传统细菌培养法相比较,探讨胶体金免疫层析(GICA)法检测烧伤创面铜绿假单胞菌(PA)的可行性. 方法 2012年1-12月,采集齐齐哈尔医学院附属第三医院烧伤科收治的96例烧伤患者创面分泌物,应用传统细菌培养法鉴定为31例阳性(31株PA)、65例阴性.(1)将2株杂交瘤细胞分别接种于5只BALB/c小鼠腹腔制备抗OprH单克隆抗体,斑点印迹法检测抗体特异性,ELISA法检测抗体型别,间接ELISA法检测抗体效价,菲竞争ELISA法检测抗体亲和力.(2)取1株判定为AmpC β内酰胺酶(简称AmpC酶)阳性的PA,提取酶提取物,单独或与弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂免疫10只BALB/c小鼠制备抗AmpC酶多克隆抗体,间接ELISA法测定抗体效价.(3)制作GICA试纸条.用1 mL胶体金(1 mg/mL)分别标记20 μg抗OprH单克隆抗体、抗AmpC酶多克隆抗体,将二者喷涂于玻璃纤维膜上并划于硝酸纤维素膜上,将1.5 mg/mL羊抗鼠IgG划于距OprH检测线1 cm处.取传统细菌培养法鉴定的31株PA及金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、鲍氏不动杆菌、奇异变形杆菌标准菌株各1株,检测试纸条特异性;采用1×105、5×105、1×106、1 ×107、1×108 CFU/mL PA标准菌株检测试纸条敏感性;将试纸条在4、37℃分别存放10、20、30 d后,观察其检测浓度为1×106、1 ×107、1×108 CFU/mL的PA标准菌株的稳定性.(4)用GICA试纸条检测96例患者临床样本,计算与传统细菌培养法鉴定PA结果的阳性符合率. 结果 (1)制备的抗体与PA重组外膜蛋白OprH有较好的结合性,经鉴定确认为抗OprH单克隆抗体.2株杂交瘤细胞分泌的抗OprH单克隆抗体均为IgG2a亚类,效价分别为1∶2.02×106、1∶1.83×10 7,亲和常数值分别为7.3×107、3.6×108.(2)抗AmpC酶多克隆抗体效价为1∶3.05×106.(3)经GICA试纸条检测,31株传统细菌培养法鉴定的PA中29株阳性、2株阴性,AmpC酶为阴性;金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、鲍氏不动杆菌、奇异变形杆菌均为PA、AmpC酶阴性.PA标准菌株浓度为1×106、1×107、1×108 CFU/mL时,为PA阳性、AmpC酶阴性;PA标准菌株浓度为5×105 CFU/mL时,为PA弱阳性、AmpC酶阴性;PA标准菌株浓度为1×105 CFU/mL时,为PA、AmpC酶阴性.除37℃放置30 d的GICA试纸条检测1 × 106 CFU/mL的PA标准菌株结果为弱阳性外,4、37℃放置各时相点GICA试纸条对1×106、1×107、1×108 CFU/mL的PA标准菌株检测结果均为阳性;AmpC酶均为阴性.(4)GICA试纸条与传统细菌培养法鉴定PA的阳性符合率为93.55％ (29/31). 结论 GICA法检测PA的灵敏度高、特异性好、需时短,且可鉴定其是否产AmpC酶. 目的與傳統細菌培養法相比較,探討膠體金免疫層析(GICA)法檢測燒傷創麵銅綠假單胞菌(PA)的可行性. 方法 2012年1-12月,採集齊齊哈爾醫學院附屬第三醫院燒傷科收治的96例燒傷患者創麵分泌物,應用傳統細菌培養法鑒定為31例暘性(31株PA)、65例陰性.(1)將2株雜交瘤細胞分彆接種于5隻BALB/c小鼠腹腔製備抗OprH單剋隆抗體,斑點印跡法檢測抗體特異性,ELISA法檢測抗體型彆,間接ELISA法檢測抗體效價,菲競爭ELISA法檢測抗體親和力.(2)取1株判定為AmpC β內酰胺酶(簡稱AmpC酶)暘性的PA,提取酶提取物,單獨或與弗氏完全佐劑、弗氏不完全佐劑免疫10隻BALB/c小鼠製備抗AmpC酶多剋隆抗體,間接ELISA法測定抗體效價.(3)製作GICA試紙條.用1 mL膠體金(1 mg/mL)分彆標記20 μg抗OprH單剋隆抗體、抗AmpC酶多剋隆抗體,將二者噴塗于玻璃纖維膜上併劃于硝痠纖維素膜上,將1.5 mg/mL羊抗鼠IgG劃于距OprH檢測線1 cm處.取傳統細菌培養法鑒定的31株PA及金黃色葡萄毬菌、錶皮葡萄毬菌、鮑氏不動桿菌、奇異變形桿菌標準菌株各1株,檢測試紙條特異性;採用1×105、5×105、1×106、1 ×107、1×108 CFU/mL PA標準菌株檢測試紙條敏感性;將試紙條在4、37℃分彆存放10、20、30 d後,觀察其檢測濃度為1×106、1 ×107、1×108 CFU/mL的PA標準菌株的穩定性.(4)用GICA試紙條檢測96例患者臨床樣本,計算與傳統細菌培養法鑒定PA結果的暘性符閤率. 結果 (1)製備的抗體與PA重組外膜蛋白OprH有較好的結閤性,經鑒定確認為抗OprH單剋隆抗體.2株雜交瘤細胞分泌的抗OprH單剋隆抗體均為IgG2a亞類,效價分彆為1∶2.02×106、1∶1.83×10 7,親和常數值分彆為7.3×107、3.6×108.(2)抗AmpC酶多剋隆抗體效價為1∶3.05×106.(3)經GICA試紙條檢測,31株傳統細菌培養法鑒定的PA中29株暘性、2株陰性,AmpC酶為陰性;金黃色葡萄毬菌、錶皮葡萄毬菌、鮑氏不動桿菌、奇異變形桿菌均為PA、AmpC酶陰性.PA標準菌株濃度為1×106、1×107、1×108 CFU/mL時,為PA暘性、AmpC酶陰性;PA標準菌株濃度為5×105 CFU/mL時,為PA弱暘性、AmpC酶陰性;PA標準菌株濃度為1×105 CFU/mL時,為PA、AmpC酶陰性.除37℃放置30 d的GICA試紙條檢測1 × 106 CFU/mL的PA標準菌株結果為弱暘性外,4、37℃放置各時相點GICA試紙條對1×106、1×107、1×108 CFU/mL的PA標準菌株檢測結果均為暘性;AmpC酶均為陰性.(4)GICA試紙條與傳統細菌培養法鑒定PA的暘性符閤率為93.55％ (29/31). 結論 GICA法檢測PA的靈敏度高、特異性好、需時短,且可鑒定其是否產AmpC酶.
목적 여전통세균배양법상비교,탐토효체금면역층석(GICA)법검측소상창면동록가단포균(PA)적가행성. 방법 2012년1-12월,채집제제합이의학원부속제삼의원소상과수치적96례소상환자창면분비물,응용전통세균배양법감정위31례양성(31주PA)、65례음성.(1)장2주잡교류세포분별접충우5지BALB/c소서복강제비항OprH단극륭항체,반점인적법검측항체특이성,ELISA법검측항체형별,간접ELISA법검측항체효개,비경쟁ELISA법검측항체친화력.(2)취1주판정위AmpC β내선알매(간칭AmpC매)양성적PA,제취매제취물,단독혹여불씨완전좌제、불씨불완전좌제면역10지BALB/c소서제비항AmpC매다극륭항체,간접ELISA법측정항체효개.(3)제작GICA시지조.용1 mL효체금(1 mg/mL)분별표기20 μg항OprH단극륭항체、항AmpC매다극륭항체,장이자분도우파리섬유막상병화우초산섬유소막상,장1.5 mg/mL양항서IgG화우거OprH검측선1 cm처.취전통세균배양법감정적31주PA급금황색포도구균、표피포도구균、포씨불동간균、기이변형간균표준균주각1주,검측시지조특이성;채용1×105、5×105、1×106、1 ×107、1×108 CFU/mL PA표준균주검측시지조민감성;장시지조재4、37℃분별존방10、20、30 d후,관찰기검측농도위1×106、1 ×107、1×108 CFU/mL적PA표준균주적은정성.(4)용GICA시지조검측96례환자림상양본,계산여전통세균배양법감정PA결과적양성부합솔. 결과 (1)제비적항체여PA중조외막단백OprH유교호적결합성,경감정학인위항OprH단극륭항체.2주잡교류세포분비적항OprH단극륭항체균위IgG2a아류,효개분별위1∶2.02×106、1∶1.83×10 7,친화상수치분별위7.3×107、3.6×108.(2)항AmpC매다극륭항체효개위1∶3.05×106.(3)경GICA시지조검측,31주전통세균배양법감정적PA중29주양성、2주음성,AmpC매위음성;금황색포도구균、표피포도구균、포씨불동간균、기이변형간균균위PA、AmpC매음성.PA표준균주농도위1×106、1×107、1×108 CFU/mL시,위PA양성、AmpC매음성;PA표준균주농도위5×105 CFU/mL시,위PA약양성、AmpC매음성;PA표준균주농도위1×105 CFU/mL시,위PA、AmpC매음성.제37℃방치30 d적GICA시지조검측1 × 106 CFU/mL적PA표준균주결과위약양성외,4、37℃방치각시상점GICA시지조대1×106、1×107、1×108 CFU/mL적PA표준균주검측결과균위양성;AmpC매균위음성.(4)GICA시지조여전통세균배양법감정PA적양성부합솔위93.55％ (29/31). 결론 GICA법검측PA적령민도고、특이성호、수시단,차가감정기시부산AmpC매.
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