安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
22期
9305-9308
,共4页
房君%孟凡华%王海涛%周欢敏
房君%孟凡華%王海濤%週歡敏
방군%맹범화%왕해도%주환민
拟蜘蛛牵丝蛋白基因%细毛羊成纤维细胞%脂质体转染%鉴定
擬蜘蛛牽絲蛋白基因%細毛羊成纖維細胞%脂質體轉染%鑒定
의지주견사단백기인%세모양성섬유세포%지질체전염%감정
Spider dragline silk-like protein gene%Fibroblast cell of fine wool sheep%Liposome transfection%Identification
[目的]建立合有拟蜘蛛牵丝蛋白基因的新疆美利奴细毛羊成纤维细胞系.[方法]采用脂质体转染,将表达拟蜘蛛牵丝基因的质粒pKap-EGFP4S转入新疆美利奴细毛羊成纤维细胞,通过G418毒性筛选获得阳性细胞系,并采用PCR、RT-PCR检测重组细胞中的目的基因表达.[结果]对体外分离培养的成纤维细胞观察表明细胞形态均为长梭形、活性良好(细胞生长曲线呈S型)、染色体数目为2n =54;通过G418筛选出共43株单克隆细胞系,经PCR鉴定拟蜘蛛牵丝蛋白基因随机整合的细胞系15株,其中挑选4个阳性细胞系经过RT-PCR检测目的基因已转录为mRNA.[结论]成功建立了拟蜘蛛牵丝蛋白基因的新疆美利奴细毛羊成纤维细胞系,为进一步通过体细胞核移植技术制备被毛含转拟蜘蛛牵丝蛋白基因克隆羊奠定基础.
[目的]建立閤有擬蜘蛛牽絲蛋白基因的新疆美利奴細毛羊成纖維細胞繫.[方法]採用脂質體轉染,將錶達擬蜘蛛牽絲基因的質粒pKap-EGFP4S轉入新疆美利奴細毛羊成纖維細胞,通過G418毒性篩選穫得暘性細胞繫,併採用PCR、RT-PCR檢測重組細胞中的目的基因錶達.[結果]對體外分離培養的成纖維細胞觀察錶明細胞形態均為長梭形、活性良好(細胞生長麯線呈S型)、染色體數目為2n =54;通過G418篩選齣共43株單剋隆細胞繫,經PCR鑒定擬蜘蛛牽絲蛋白基因隨機整閤的細胞繫15株,其中挑選4箇暘性細胞繫經過RT-PCR檢測目的基因已轉錄為mRNA.[結論]成功建立瞭擬蜘蛛牽絲蛋白基因的新疆美利奴細毛羊成纖維細胞繫,為進一步通過體細胞覈移植技術製備被毛含轉擬蜘蛛牽絲蛋白基因剋隆羊奠定基礎.
[목적]건립합유의지주견사단백기인적신강미리노세모양성섬유세포계.[방법]채용지질체전염,장표체의지주견사기인적질립pKap-EGFP4S전입신강미리노세모양성섬유세포,통과G418독성사선획득양성세포계,병채용PCR、RT-PCR검측중조세포중적목적기인표체.[결과]대체외분리배양적성섬유세포관찰표명세포형태균위장사형、활성량호(세포생장곡선정S형)、염색체수목위2n =54;통과G418사선출공43주단극륭세포계,경PCR감정의지주견사단백기인수궤정합적세포계15주,기중도선4개양성세포계경과RT-PCR검측목적기인이전록위mRNA.[결론]성공건립료의지주견사단백기인적신강미리노세모양성섬유세포계,위진일보통과체세포핵이식기술제비피모함전의지주견사단백기인극륭양전정기출.
