中国临床医学
中國臨床醫學
중국림상의학
CLINICAL MEDICAL JOURNAL OF CHINA
2013年
1期
5-7
,共3页
小干扰RNA%成纤维细胞激活蛋白3%肺癌干细胞%增殖%侵袭
小榦擾RNA%成纖維細胞激活蛋白3%肺癌榦細胞%增殖%侵襲
소간우RNA%성섬유세포격활단백3%폐암간세포%증식%침습
目的:探讨小干扰RNA(siRNA)抑制成纤维细胞激活蛋白3(fibroblast activation protein 3,FAP3)基因表达对肺癌干细胞增殖和侵袭的影响.方法:采用流式细胞术从肺癌细胞株A549中分选出CD44+/CD133+的肺癌的肿瘤干细胞(cancer stem cells.CSCs).将肺癌CSCs分为3组:空白对照组(不转染任何质粒)、siRNA-FAP组(转染靶向沉默FAP3表达的siRNA质粒)、阴性对照组(转染包含随机序列的siRNA质粒).采用MTT比色法检测靶向FAP3表达的siRNA(siRNA-FAP3)转染12、24、48和72 h后对细胞增殖的影响；采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测转染72 h后细胞株中FAP3、Ki67的mRNA和蛋白质的表达情况；采用软琼脂克隆集落形成实验检测siRNA-FAP3对肺癌CSCs侵袭能力的影响.结果:转染48 h和72 h后,siRNA-FAP3组的细胞增殖抑制率[(24.67±1.08)％,(53.98±3.75)％]大于阴性对照组[(3.76±0.88)％,(4.53±1.01)％]及空白对照组[(2.34±0.41)％,(3.28±0.65)％],差异均有统计学意义(P分别＜0.05和0.01).转染72 h后,siRNA-FAP组细胞中FAP3和Ki67基因的mRNA表达水平(0.32±0.06,0.18±0.02)显著低于阴性对照组(1.03±0.12,0.99±0.17)和空白对照组(1.02±0.09,0.97±0.11),差异有统计学意义(P＜0.01).转染72 h后,siRNA-FAP组细胞中FAP3和Ki67蛋白表达水平(0.16±0.05,0.25±0.09)显著低于阴性对照组(0.49±0.26,0.47±0.13)和空白对照组(0.59±0.27,0.63±0.22),差异有统计学意义(P＜0.05).siRNA-FAP组细胞克隆形成率[(13.09±5.21)％]显著低于阴性对照组[(77.59±8.29)％]和空白对照组[(83.86±10.11)％],差异有统计学意义(P＜0.01).结论:转染siRNA可有效抑制肺癌CSCs中FAP3蛋白的表达,并且还可抑制CSCs的体外增殖和侵袭能力.
目的:探討小榦擾RNA(siRNA)抑製成纖維細胞激活蛋白3(fibroblast activation protein 3,FAP3)基因錶達對肺癌榦細胞增殖和侵襲的影響.方法:採用流式細胞術從肺癌細胞株A549中分選齣CD44+/CD133+的肺癌的腫瘤榦細胞(cancer stem cells.CSCs).將肺癌CSCs分為3組:空白對照組(不轉染任何質粒)、siRNA-FAP組(轉染靶嚮沉默FAP3錶達的siRNA質粒)、陰性對照組(轉染包含隨機序列的siRNA質粒).採用MTT比色法檢測靶嚮FAP3錶達的siRNA(siRNA-FAP3)轉染12、24、48和72 h後對細胞增殖的影響；採用實時熒光定量逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)法和蛋白質印跡法(Western blot)分彆檢測轉染72 h後細胞株中FAP3、Ki67的mRNA和蛋白質的錶達情況；採用軟瓊脂剋隆集落形成實驗檢測siRNA-FAP3對肺癌CSCs侵襲能力的影響.結果:轉染48 h和72 h後,siRNA-FAP3組的細胞增殖抑製率[(24.67±1.08)％,(53.98±3.75)％]大于陰性對照組[(3.76±0.88)％,(4.53±1.01)％]及空白對照組[(2.34±0.41)％,(3.28±0.65)％],差異均有統計學意義(P分彆＜0.05和0.01).轉染72 h後,siRNA-FAP組細胞中FAP3和Ki67基因的mRNA錶達水平(0.32±0.06,0.18±0.02)顯著低于陰性對照組(1.03±0.12,0.99±0.17)和空白對照組(1.02±0.09,0.97±0.11),差異有統計學意義(P＜0.01).轉染72 h後,siRNA-FAP組細胞中FAP3和Ki67蛋白錶達水平(0.16±0.05,0.25±0.09)顯著低于陰性對照組(0.49±0.26,0.47±0.13)和空白對照組(0.59±0.27,0.63±0.22),差異有統計學意義(P＜0.05).siRNA-FAP組細胞剋隆形成率[(13.09±5.21)％]顯著低于陰性對照組[(77.59±8.29)％]和空白對照組[(83.86±10.11)％],差異有統計學意義(P＜0.01).結論:轉染siRNA可有效抑製肺癌CSCs中FAP3蛋白的錶達,併且還可抑製CSCs的體外增殖和侵襲能力.
목적:탐토소간우RNA(siRNA)억제성섬유세포격활단백3(fibroblast activation protein 3,FAP3)기인표체대폐암간세포증식화침습적영향.방법:채용류식세포술종폐암세포주A549중분선출CD44+/CD133+적폐암적종류간세포(cancer stem cells.CSCs).장폐암CSCs분위3조:공백대조조(불전염임하질립)、siRNA-FAP조(전염파향침묵FAP3표체적siRNA질립)、음성대조조(전염포함수궤서렬적siRNA질립).채용MTT비색법검측파향FAP3표체적siRNA(siRNA-FAP3)전염12、24、48화72 h후대세포증식적영향；채용실시형광정량역전록-취합매련반응(RT-PCR)법화단백질인적법(Western blot)분별검측전염72 h후세포주중FAP3、Ki67적mRNA화단백질적표체정황；채용연경지극륭집락형성실험검측siRNA-FAP3대폐암CSCs침습능력적영향.결과:전염48 h화72 h후,siRNA-FAP3조적세포증식억제솔[(24.67±1.08)％,(53.98±3.75)％]대우음성대조조[(3.76±0.88)％,(4.53±1.01)％]급공백대조조[(2.34±0.41)％,(3.28±0.65)％],차이균유통계학의의(P분별＜0.05화0.01).전염72 h후,siRNA-FAP조세포중FAP3화Ki67기인적mRNA표체수평(0.32±0.06,0.18±0.02)현저저우음성대조조(1.03±0.12,0.99±0.17)화공백대조조(1.02±0.09,0.97±0.11),차이유통계학의의(P＜0.01).전염72 h후,siRNA-FAP조세포중FAP3화Ki67단백표체수평(0.16±0.05,0.25±0.09)현저저우음성대조조(0.49±0.26,0.47±0.13)화공백대조조(0.59±0.27,0.63±0.22),차이유통계학의의(P＜0.05).siRNA-FAP조세포극륭형성솔[(13.09±5.21)％]현저저우음성대조조[(77.59±8.29)％]화공백대조조[(83.86±10.11)％],차이유통계학의의(P＜0.01).결론:전염siRNA가유효억제폐암CSCs중FAP3단백적표체,병차환가억제CSCs적체외증식화침습능력.
