CAJ | 학술논문

背景:研究发现转录抑制因子Pokemon是一种关键性致癌因子,在多种人类恶性肿瘤中表达异常上调,在体内、外实验中均能促进细胞的肿瘤性转化.Pokemon对抑癌基因ARF具有特异性转录抑制作用.目的:应用RNA干扰技术抑制人结肠癌细胞株HT-29的Pokemon表达,观察其表达抑制对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响并探讨其可能的分子机制.方法:根据Pokemon cDNA序列设计干扰序列,构建重组干扰质粒,经脂质体介导转染入HT-29细胞.以real time RT-PCR和蛋白质印迹法检测Pokemon、p14ARF、p53表达,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡.结果:Pokemon siRNA能有效抑制HT-29细胞中的Pokemon mRNA和蛋白表达,mRNA相对表达量为0.29 ±0.04,同时p14ARF、p53 mRNA和蛋白表达明显上调,mRNA相对表达量分别为3.03 ±0.49和2.80±0.25.与转染无效序列siRNA的HT-29细胞相比,Pokemon表达抑制的HT-29细胞G0/G1期细胞比例增加(43.6％±2.3％对34.7％±1.9％,P ＜0.05),细胞凋亡增多(10.7％±1.9％对2.7％±0.4％,P＜0.05).结论:人结肠癌细胞中的Pokemon表达与p14ARF、p53表达之间存在负相关关系,抑制Pokemon可通过上调p14ARF-p53信号通路阻滞肿瘤细胞的细胞周期进程,并诱导细胞凋亡.调控Pokemon-p14ARF-p53信号通路有望作为结肠癌的治疗靶点.
배경:연구발현전록억제인자Pokemon시일충관건성치암인자,재다충인류악성종류중표체이상상조,재체내、외실험중균능촉진세포적종류성전화.Pokemon대억암기인ARF구유특이성전록억제작용.목적:응용RNA간우기술억제인결장암세포주HT-29적Pokemon표체,관찰기표체억제대종류세포증식화조망적영향병탐토기가능적분자궤제.방법:근거Pokemon cDNA서렬설계간우서렬,구건중조간우질립,경지질체개도전염입HT-29세포.이real time RT-PCR화단백질인적법검측Pokemon、p14ARF、p53표체,류식세포술검측세포주기화세포조망.결과:Pokemon siRNA능유효억제HT-29세포중적Pokemon mRNA화단백표체,mRNA상대표체량위0.29 ±0.04,동시p14ARF、p53 mRNA화단백표체명현상조,mRNA상대표체량분별위3.03 ±0.49화2.80±0.25.여전염무효서렬siRNA적HT-29세포상비,Pokemon표체억제적HT-29세포G0/G1기세포비례증가(43.6％±2.3％대34.7％±1.9％,P ＜0.05),세포조망증다(10.7％±1.9％대2.7％±0.4％,P＜0.05).결론:인결장암세포중적Pokemon표체여p14ARF、p53표체지간존재부상관관계,억제Pokemon가통과상조p14ARF-p53신호통로조체종류세포적세포주기진정,병유도세포조망.조공Pokemon-p14ARF-p53신호통로유망작위결장암적치료파점.