CAJ | 학술논문

目的研究抑癌基因RB1在小鼠不同阶段卵母细胞中的mRNA表达及DNA甲基化的状态,旨在探讨RB1基因在卵母细胞生长发育中的作用,为胚胎植入前肿瘤的诊断提供理论基础. 方法采用改良的逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测RB1在不同发育阶段卵母细胞[GⅤ期(生殖泡期)、MⅠ期(第一次减数分裂中期)、MⅡ期(第二次减数分裂中期)]中的mRNA表达,即细胞裂解后直接逆转录+全转录扩增cDNA+荧光定量PCR扩增方法检测不同发育阶段卵母细胞的相对表达量.同时还进行DNA甲基化的研究:细胞裂解后直接进行亚硫酸盐处理,再进行半巢式PCR扩增出目的片段,把目的片段进行T载体(TA)克隆测序RB1在不同阶段卵母细胞中的甲基化状态. 结果 RB1在小鼠GⅤ期、MⅠ期、MⅡ期卵母细胞的表达量分别是:(0.054±0.004)、(0.080±-0.005)、(0.101±0.005),RB1在MⅡ期中的表达量约是GⅤ期的2倍,差别具有统计学意义(P＜0.05).RB1甲基化:MⅠ期和MⅡ期卵母细胞的24个CpG位点C完全变成T,所有CpG位点完全非甲基化.GⅤ期偶见1～2个CpG位点甲基化,所有CpG位点基本完全非甲基化. 结论 RB1 mRNA随着卵母细胞的生长发育表达量不断增加,RB1 DNA在卵母细胞(GⅤ～MⅡ)中尚未发生甲基化.
목적 연구억암기인RB1재소서불동계단란모세포중적mRNA표체급DNA갑기화적상태,지재탐토RB1기인재란모세포생장발육중적작용,위배태식입전종류적진단제공이론기출. 방법 채용개량적역전록-취합매련식반응(RT-PCR)방법검측RB1재불동발육계단란모세포[GⅤ기(생식포기)、MⅠ기(제일차감수분렬중기)、MⅡ기(제이차감수분렬중기)]중적mRNA표체,즉세포렬해후직접역전록+전전록확증cDNA+형광정량PCR확증방법검측불동발육계단란모세포적상대표체량.동시환진행DNA갑기화적연구:세포렬해후직접진행아류산염처리,재진행반소식PCR확증출목적편단,파목적편단진행T재체(TA)극륭측서RB1재불동계단란모세포중적갑기화상태. 결과 RB1재소서GⅤ기、MⅠ기、MⅡ기란모세포적표체량분별시:(0.054±0.004)、(0.080±-0.005)、(0.101±0.005),RB1재MⅡ기중적표체량약시GⅤ기적2배,차별구유통계학의의(P＜0.05).RB1갑기화:MⅠ기화MⅡ기란모세포적24개CpG위점C완전변성T,소유CpG위점완전비갑기화.GⅤ기우견1～2개CpG위점갑기화,소유CpG위점기본완전비갑기화. 결론 RB1 mRNA수착란모세포적생장발육표체량불단증가,RB1 DNA재란모세포(GⅤ～MⅡ)중상미발생갑기화.