CAJ | 학술논문

[目的]检测不同克隆方法所获得的转基因绵羊的外源基因及其启动子的甲基化水平,以及蛋白表达的差异.[方法]通过体细胞克隆、干细胞克隆和卵周隙内注射法将外源基因增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)和成纤维细胞内生长因子5(fibroblast growth factor 5,FGF5)分别导入绵羊体内,获得转基因绵羊,以CMV为启动子,利用完全重亚硫酸盐沉淀测序法检测绵羊尾部组织外源基因启动子及编码区甲基化状态,Western blot检测外源基因的蛋白表达水平.[结果]启动子区的甲基化水平最高的是干细胞克隆,其次是体细胞克隆,卵周隙注射最低；eGFP编码区的甲基化水平以卵周隙注射最高,其次是干细胞克隆；FGF5编码区甲基化水平体细胞克隆高于卵周隙注射法.外源基因蛋白的表达量同其启动子区域的甲基化水平呈负相关关系.[结论]该研究结果提示不同的克隆方法可能会影响外源基因的甲基化水平,从而影响到外源基因的表达.
[목적]검측불동극륭방법소획득적전기인면양적외원기인급기계동자적갑기화수평,이급단백표체적차이.[방법]통과체세포극륭、간세포극륭화란주극내주사법장외원기인증강형록색형광단백(enhanced green fluorescent protein,eGFP)화성섬유세포내생장인자5(fibroblast growth factor 5,FGF5)분별도입면양체내,획득전기인면양,이CMV위계동자,이용완전중아류산염침정측서법검측면양미부조직외원기인계동자급편마구갑기화상태,Western blot검측외원기인적단백표체수평.[결과]계동자구적갑기화수평최고적시간세포극륭,기차시체세포극륭,란주극주사최저；eGFP편마구적갑기화수평이란주극주사최고,기차시간세포극륭；FGF5편마구갑기화수평체세포극륭고우란주극주사법.외원기인단백적표체량동기계동자구역적갑기화수평정부상관관계.[결론]해연구결과제시불동적극륭방법가능회영향외원기인적갑기화수평,종이영향도외원기인적표체.