新疆农业大学学报
新疆農業大學學報
신강농업대학학보
JOURNAL OF XINJIANG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2013年
4期
259-264
,共6页
宫玉玲%王克栋%孙建华%熊浩%石明%冉多良
宮玉玲%王剋棟%孫建華%熊浩%石明%冉多良
궁옥령%왕극동%손건화%웅호%석명%염다량
克隆%真核表达%白细胞介素-4%293T细胞%免疫佐剂
剋隆%真覈錶達%白細胞介素-4%293T細胞%免疫佐劑
극륭%진핵표체%백세포개소-4%293T세포%면역좌제
cloning%eukaryotic expression%interleukin-4%293T cells%vaccinee adjuvant
应用RT-PCR技术从植物血凝素(PHA)活化的牛外周血淋巴细胞中扩增出牛白细胞介素4(IL-4)特异性目的片段,将其克隆到真核表达载体pVAX1,双酶切及测序鉴定正确后,将构建好的重组质粒pVAX1-IL-4应用脂质体LipofectamineTM 2000转染至293T细胞,经RT-PCR检测IL-4可进行转录表达,且MTT检测其具有生物学活性,表明IL-4在转染细胞中可以成功表达.然后将构建好的pVAX1-IL-4作为基因佐剂来研究其对牛病毒性腹泻粘膜病毒(BVD)核酸疫苗pVAV1-E0的免疫增强作用.经ELISA和MTT检测结果表明,pVAX1-IL-4同pVAV1-E0联合免疫组小鼠的特异性抗体水平、淋巴细胞增殖水平与pVAV1-E0单疫苗免疫组相比差异显著(P＜0.05).证明重组质粒pVAX1-IL-4可作为佐剂与核酸疫苗共同作用来提高后者的免疫原性.
應用RT-PCR技術從植物血凝素(PHA)活化的牛外週血淋巴細胞中擴增齣牛白細胞介素4(IL-4)特異性目的片段,將其剋隆到真覈錶達載體pVAX1,雙酶切及測序鑒定正確後,將構建好的重組質粒pVAX1-IL-4應用脂質體LipofectamineTM 2000轉染至293T細胞,經RT-PCR檢測IL-4可進行轉錄錶達,且MTT檢測其具有生物學活性,錶明IL-4在轉染細胞中可以成功錶達.然後將構建好的pVAX1-IL-4作為基因佐劑來研究其對牛病毒性腹瀉粘膜病毒(BVD)覈痠疫苗pVAV1-E0的免疫增彊作用.經ELISA和MTT檢測結果錶明,pVAX1-IL-4同pVAV1-E0聯閤免疫組小鼠的特異性抗體水平、淋巴細胞增殖水平與pVAV1-E0單疫苗免疫組相比差異顯著(P＜0.05).證明重組質粒pVAX1-IL-4可作為佐劑與覈痠疫苗共同作用來提高後者的免疫原性.
응용RT-PCR기술종식물혈응소(PHA)활화적우외주혈림파세포중확증출우백세포개소4(IL-4)특이성목적편단,장기극륭도진핵표체재체pVAX1,쌍매절급측서감정정학후,장구건호적중조질립pVAX1-IL-4응용지질체LipofectamineTM 2000전염지293T세포,경RT-PCR검측IL-4가진행전록표체,차MTT검측기구유생물학활성,표명IL-4재전염세포중가이성공표체.연후장구건호적pVAX1-IL-4작위기인좌제래연구기대우병독성복사점막병독(BVD)핵산역묘pVAV1-E0적면역증강작용.경ELISA화MTT검측결과표명,pVAX1-IL-4동pVAV1-E0연합면역조소서적특이성항체수평、림파세포증식수평여pVAV1-E0단역묘면역조상비차이현저(P＜0.05).증명중조질립pVAX1-IL-4가작위좌제여핵산역묘공동작용래제고후자적면역원성.
