色谱
色譜
색보
CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY
2013年
6期
522-530
,共9页
李楠楠%周廉淇%毛心丽%张姣%卫军营%林虹君%李佳斌%田芳%张养军
李楠楠%週廉淇%毛心麗%張姣%衛軍營%林虹君%李佳斌%田芳%張養軍
리남남%주렴기%모심려%장교%위군영%림홍군%리가빈%전방%장양군
定量肽段串联体蛋白质%同位素稀释%多反应监测质谱%18O标记%蛋白质组学
定量肽段串聯體蛋白質%同位素稀釋%多反應鑑測質譜%18O標記%蛋白質組學
정량태단천련체단백질%동위소희석%다반응감측질보%18O표기%단백질조학
concatamers of Q peptides (QconCATs)%isotope dilution%multiple reaction monitoring mass spectrometry%18O labeling%proteomics
建立了定量肽段串联体蛋白质(concatamers of Q peptides,QconCATs)结合18O同位素标记-多反应监测质谱的蛋白质绝对定量新方法.首先对QconCAT重组蛋白质进行了纯度表征,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表征结果表明重组蛋白质的纯度在99％以上,相对分子质量约为63.4 kDa.对QconCAT重组蛋白质酶切后的肽段混合物进行质谱分析,并经pFind和pLabel软件处理,验证了目标肽段.还考察了QconCAT重组蛋白质的酶切效率和18O标记效率,并对QconCAT蛋白质结合18O标记-同位素稀释-多反应监测质谱方法进行了评价.实验结果表明,采用该方法对腾冲嗜热厌氧菌(Thermoanaerobacter tengcongensis,TTE)中选定蛋白质的肽段进行绝对含量测定时,相对标准偏差小于20％,准确度较高,说明该方法可用于复杂生物样本中蛋白质的绝对定量.更重要的是所建方法不仅解决了细胞培养氨基酸稳定同位素标记(SILAC)技术的重标试剂价格昂贵的问题,也为定量蛋白质组学提供了一种新的方法.
建立瞭定量肽段串聯體蛋白質(concatamers of Q peptides,QconCATs)結閤18O同位素標記-多反應鑑測質譜的蛋白質絕對定量新方法.首先對QconCAT重組蛋白質進行瞭純度錶徵,十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)錶徵結果錶明重組蛋白質的純度在99％以上,相對分子質量約為63.4 kDa.對QconCAT重組蛋白質酶切後的肽段混閤物進行質譜分析,併經pFind和pLabel軟件處理,驗證瞭目標肽段.還攷察瞭QconCAT重組蛋白質的酶切效率和18O標記效率,併對QconCAT蛋白質結閤18O標記-同位素稀釋-多反應鑑測質譜方法進行瞭評價.實驗結果錶明,採用該方法對騰遲嗜熱厭氧菌(Thermoanaerobacter tengcongensis,TTE)中選定蛋白質的肽段進行絕對含量測定時,相對標準偏差小于20％,準確度較高,說明該方法可用于複雜生物樣本中蛋白質的絕對定量.更重要的是所建方法不僅解決瞭細胞培養氨基痠穩定同位素標記(SILAC)技術的重標試劑價格昂貴的問題,也為定量蛋白質組學提供瞭一種新的方法.
건립료정량태단천련체단백질(concatamers of Q peptides,QconCATs)결합18O동위소표기-다반응감측질보적단백질절대정량신방법.수선대QconCAT중조단백질진행료순도표정,십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)표정결과표명중조단백질적순도재99％이상,상대분자질량약위63.4 kDa.대QconCAT중조단백질매절후적태단혼합물진행질보분석,병경pFind화pLabel연건처리,험증료목표태단.환고찰료QconCAT중조단백질적매절효솔화18O표기효솔,병대QconCAT단백질결합18O표기-동위소희석-다반응감측질보방법진행료평개.실험결과표명,채용해방법대등충기열염양균(Thermoanaerobacter tengcongensis,TTE)중선정단백질적태단진행절대함량측정시,상대표준편차소우20％,준학도교고,설명해방법가용우복잡생물양본중단백질적절대정량.경중요적시소건방법불부해결료세포배양안기산은정동위소표기(SILAC)기술적중표시제개격앙귀적문제,야위정량단백질조학제공료일충신적방법.
