CAJ | 학술논문

目的本研究旨在通过对贾第鞭毛虫和隐孢子虫(简称“两虫”)进行序列信息分析的基础上,利用焦磷酸测序技术建立一种快速、简单地确证两虫的方法.方法通过序列信息比对,对贾第鞭毛虫的磷酸丙糖异构酶(triose phosphate isomerase,tim)基因和隐孢子虫18S rRNA基因的保守区段设计扩增引物及测序引物.用Sheather's蔗糖密度离心法从粪便标本中分离纯化贾第鞭毛虫孢囊和隐孢子虫卵囊.酚-氯仿法抽提孢囊、卵囊总DNA,PCR扩增目的基因片段,采用焦磷酸测序技术(P yrosequencing Technology,PSQ)针对两虫基因保守核苷酸区段进行测序分析.同时利用扩增引物与其他原虫进行特异性试验,利用测序引物进行重复性试验.结果通过序列信息比对寻找到了表征贾第鞭毛虫tim基因和隐孢子虫18SrRNA基因的核苷酸保守区段,经焦磷酸测序后能进一步确证虫株的序列信息,同时与Sanger法测序结果比对显示一致.特异性试验表明,不与其它原虫发生交叉反应；重复性试验表明,重现性为100％.结论基于序列分析的焦磷酸测序技术可以作为进一步确证两虫的方法使用.
목적 본연구지재통과대가제편모충화은포자충(간칭“량충”)진행서렬신식분석적기출상,이용초린산측서기술건립일충쾌속、간단지학증량충적방법.방법 통과서렬신식비대,대가제편모충적린산병당이구매(triose phosphate isomerase,tim)기인화은포자충18S rRNA기인적보수구단설계확증인물급측서인물.용Sheather's자당밀도리심법종분편표본중분리순화가제편모충포낭화은포자충란낭.분-록방법추제포낭、란낭총DNA,PCR확증목적기인편단,채용초린산측서기술(P yrosequencing Technology,PSQ)침대량충기인보수핵감산구단진행측서분석.동시이용확증인물여기타원충진행특이성시험,이용측서인물진행중복성시험.결과 통과서렬신식비대심조도료표정가제편모충tim기인화은포자충18SrRNA기인적핵감산보수구단,경초린산측서후능진일보학증충주적서렬신식,동시여Sanger법측서결과비대현시일치.특이성시험표명,불여기타원충발생교차반응；중복성시험표명,중현성위100％.결론 기우서렬분석적초린산측서기술가이작위진일보학증량충적방법사용.