CAJ | 학술논문

[目的]建立针对鸡白介素6(IL-6)、白介素17(IL-17)和γ干扰素(IFN-γ)的实时荧光定量PCR检测方法,为细胞因子的定量检测及病毒致病机制的研究奠定基础.[方法]根据GenBank已发表的鸡IL-6、IL-17、IFN-γ和3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因保守序列,设计并合成4对相应的特异性引物,以鸡胚成纤维细胞的cDNA为模板构建重组质粒,对退火温度、引物浓度等SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR反应条件进行优化,建立各基因的标准曲线,并进行特异性、敏感性、重复性试验.[结果]GAPDH、IL-6、IL-17和IFN-γ的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR扩增效率分别是98.2％、99.2％、102.0％和100.8％,相应的标准误差为0.00666、0.00813、0.00365和0.00458.特异性试验结果显示各基因的溶解曲线均呈单一溶解峰,敏感性试验结果表明各基因的检测下限均为100拷贝,重复性试验结果表明组内变异系数均小于2.00％.[结论]建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR具有敏感性高、重复性好、特异性强等特点,为快速检测和定量鸡源IL-6、IL-17和IFN-γ的表达水平提供了技术平台.
[목적]건립침대계백개소6(IL-6)、백개소17(IL-17)화γ간우소(IFN-γ)적실시형광정량PCR검측방법,위세포인자적정량검측급병독치병궤제적연구전정기출.[방법]근거GenBank이발표적계IL-6、IL-17、IFN-γ화3-린산감유철탈경매(GAPDH)기인보수서렬,설계병합성4대상응적특이성인물,이계배성섬유세포적cDNA위모판구건중조질립,대퇴화온도、인물농도등SYBR GreenⅠ실시형광정량PCR반응조건진행우화,건립각기인적표준곡선,병진행특이성、민감성、중복성시험.[결과]GAPDH、IL-6、IL-17화IFN-γ적SYBR GreenⅠ실시형광정량PCR확증효솔분별시98.2％、99.2％、102.0％화100.8％,상응적표준오차위0.00666、0.00813、0.00365화0.00458.특이성시험결과현시각기인적용해곡선균정단일용해봉,민감성시험결과표명각기인적검측하한균위100고패,중복성시험결과표명조내변이계수균소우2.00％.[결론]건립적SYBR Green Ⅰ실시형광정량PCR구유민감성고、중복성호、특이성강등특점,위쾌속검측화정량계원IL-6、IL-17화IFN-γ적표체수평제공료기술평태.