西部医学
西部醫學
서부의학
MEDICAL JOURNAL OF WEST CHINA
2013年
11期
1608-1610,1615
,共4页
李冉%杨文理%覃扬%魏玲%沈文燕%刘秋英%俞小琴
李冉%楊文理%覃颺%魏玲%瀋文燕%劉鞦英%俞小琴
리염%양문리%담양%위령%침문연%류추영%유소금
固定方法%免疫荧光%胞浆蛋白%核蛋白
固定方法%免疫熒光%胞漿蛋白%覈蛋白
고정방법%면역형광%포장단백%핵단백
Fixation method%Immunofluorescence%Cytoplasmic protein%Nuclear protein
目的 比较不同的固定方法对细胞内胞浆蛋白Vigilin和核蛋白CTCF的免疫荧光染色结果的影响.方法 在免疫染色前,分别采用四种方法对HepG2细胞进行固定及通透:①纯甲醇-20℃处理8min后,再用80％丙酮—20℃处理1min.②甲醇;丙酮的1∶1混合溶剂-20℃处理10min.③在方案2的基础上,再用0.1％ Triton-X-100冰上通透10min.④4％多聚甲醛室温固定10min后,用0.1％％Triton-X-100冰上通透10min.结果 采用方案①、②、③、④得到的胞浆蛋白vigilin在细胞内的大致分布无明显差异,但用方案④处理后,染色效果更为清晰而能更好地观察到细胞的细微结构;另外,采用方案①和方案②处理细胞后,对核蛋白CTCF进行免疫染色,可见CTCF分布于胞浆;方案③中,在纯甲醇固定后,若用0.1 ％Triton-X-100通透,则CTCF显示主要分布于细胞核内,胞质内亦有阳性染色;方案④的通透条件下,CTCF特异性分布于细胞核,胞质内几乎无阳性染色.结论 不同的固定及通透方法对免疫染色的结果影响很大,应针对抗原特点,采用适宜的固定方法,以得到正确的实验结果.
目的 比較不同的固定方法對細胞內胞漿蛋白Vigilin和覈蛋白CTCF的免疫熒光染色結果的影響.方法 在免疫染色前,分彆採用四種方法對HepG2細胞進行固定及通透:①純甲醇-20℃處理8min後,再用80％丙酮—20℃處理1min.②甲醇;丙酮的1∶1混閤溶劑-20℃處理10min.③在方案2的基礎上,再用0.1％ Triton-X-100冰上通透10min.④4％多聚甲醛室溫固定10min後,用0.1％％Triton-X-100冰上通透10min.結果 採用方案①、②、③、④得到的胞漿蛋白vigilin在細胞內的大緻分佈無明顯差異,但用方案④處理後,染色效果更為清晰而能更好地觀察到細胞的細微結構;另外,採用方案①和方案②處理細胞後,對覈蛋白CTCF進行免疫染色,可見CTCF分佈于胞漿;方案③中,在純甲醇固定後,若用0.1 ％Triton-X-100通透,則CTCF顯示主要分佈于細胞覈內,胞質內亦有暘性染色;方案④的通透條件下,CTCF特異性分佈于細胞覈,胞質內幾乎無暘性染色.結論 不同的固定及通透方法對免疫染色的結果影響很大,應針對抗原特點,採用適宜的固定方法,以得到正確的實驗結果.
목적 비교불동적고정방법대세포내포장단백Vigilin화핵단백CTCF적면역형광염색결과적영향.방법 재면역염색전,분별채용사충방법대HepG2세포진행고정급통투:①순갑순-20℃처리8min후,재용80％병동—20℃처리1min.②갑순;병동적1∶1혼합용제-20℃처리10min.③재방안2적기출상,재용0.1％ Triton-X-100빙상통투10min.④4％다취갑철실온고정10min후,용0.1％％Triton-X-100빙상통투10min.결과 채용방안①、②、③、④득도적포장단백vigilin재세포내적대치분포무명현차이,단용방안④처리후,염색효과경위청석이능경호지관찰도세포적세미결구;령외,채용방안①화방안②처리세포후,대핵단백CTCF진행면역염색,가견CTCF분포우포장;방안③중,재순갑순고정후,약용0.1 ％Triton-X-100통투,칙CTCF현시주요분포우세포핵내,포질내역유양성염색;방안④적통투조건하,CTCF특이성분포우세포핵,포질내궤호무양성염색.결론 불동적고정급통투방법대면역염색적결과영향흔대,응침대항원특점,채용괄의적고정방법,이득도정학적실험결과.
