实用医学杂志
實用醫學雜誌
실용의학잡지
THE JOURNAL OF PRACTICAL MEDICINE
2013年
17期
2793-2796
,共4页
肖博宇%付晓%李春阳%夏燕%唐淑君%杨文%王艳林
肖博宇%付曉%李春暘%夏燕%唐淑君%楊文%王豔林
초박우%부효%리춘양%하연%당숙군%양문%왕염림
血管内皮生长因子受体2%原核表达%蛋白纯化%小鼠
血管內皮生長因子受體2%原覈錶達%蛋白純化%小鼠
혈관내피생장인자수체2%원핵표체%단백순화%소서
Vascular endothelial growth factor receptor 2%Prokaryotic expression%Protein purification%Antibody
目的:原核表达和纯化小鼠血管内皮生长因子受体2 (VEGFR-2)胞外区功能片段并用于抗VEGFR-2抗体的检测.方法:用PCR技术扩增编码VEGFR-2胞外区的DNA片段,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)并转化大肠杆菌Rossetta(DE3).在尿素变性条件下用Ni-NTA树脂亲和层析纯化IPTG诱导表达的基因融合蛋白,并用抗His抗体和抗VEGFR-2抗体分别对融合蛋白进行Western blotting鉴定.ELISA法用于分析VEGFR-2胞外区功能片段在检测抗VEGFR-2抗体中的应用价值.结果:克隆获得为小鼠VEGFR-2胞外功能区(Aa 134-Aa417)编码的DNA片段并构建原核表达质粒.将上述质粒转化大肠杆菌后,高效诱导表达出VEGFR-2胞外区功能片段的融合蛋白.尿素变性条件下纯化的融合蛋白能特异性被抗His标签抗体和抗VEGFR-2抗体识别和结合.用上述原核表达的VEGFR融合蛋白建立的ELISA方法可检测样品中抗VEGFR-2抗体的含量.结论:本实验成功建立了VEGFR-2胞外区功能片段原核表达和纯化的方法,获得的VEGFR-2胞外区功能片段可用于抗VEGFR-2抗体效价的检测.
目的:原覈錶達和純化小鼠血管內皮生長因子受體2 (VEGFR-2)胞外區功能片段併用于抗VEGFR-2抗體的檢測.方法:用PCR技術擴增編碼VEGFR-2胞外區的DNA片段,將其剋隆到原覈錶達載體pET28a(+)併轉化大腸桿菌Rossetta(DE3).在尿素變性條件下用Ni-NTA樹脂親和層析純化IPTG誘導錶達的基因融閤蛋白,併用抗His抗體和抗VEGFR-2抗體分彆對融閤蛋白進行Western blotting鑒定.ELISA法用于分析VEGFR-2胞外區功能片段在檢測抗VEGFR-2抗體中的應用價值.結果:剋隆穫得為小鼠VEGFR-2胞外功能區(Aa 134-Aa417)編碼的DNA片段併構建原覈錶達質粒.將上述質粒轉化大腸桿菌後,高效誘導錶達齣VEGFR-2胞外區功能片段的融閤蛋白.尿素變性條件下純化的融閤蛋白能特異性被抗His標籤抗體和抗VEGFR-2抗體識彆和結閤.用上述原覈錶達的VEGFR融閤蛋白建立的ELISA方法可檢測樣品中抗VEGFR-2抗體的含量.結論:本實驗成功建立瞭VEGFR-2胞外區功能片段原覈錶達和純化的方法,穫得的VEGFR-2胞外區功能片段可用于抗VEGFR-2抗體效價的檢測.
목적:원핵표체화순화소서혈관내피생장인자수체2 (VEGFR-2)포외구공능편단병용우항VEGFR-2항체적검측.방법:용PCR기술확증편마VEGFR-2포외구적DNA편단,장기극륭도원핵표체재체pET28a(+)병전화대장간균Rossetta(DE3).재뇨소변성조건하용Ni-NTA수지친화층석순화IPTG유도표체적기인융합단백,병용항His항체화항VEGFR-2항체분별대융합단백진행Western blotting감정.ELISA법용우분석VEGFR-2포외구공능편단재검측항VEGFR-2항체중적응용개치.결과:극륭획득위소서VEGFR-2포외공능구(Aa 134-Aa417)편마적DNA편단병구건원핵표체질립.장상술질립전화대장간균후,고효유도표체출VEGFR-2포외구공능편단적융합단백.뇨소변성조건하순화적융합단백능특이성피항His표첨항체화항VEGFR-2항체식별화결합.용상술원핵표체적VEGFR융합단백건립적ELISA방법가검측양품중항VEGFR-2항체적함량.결론:본실험성공건립료VEGFR-2포외구공능편단원핵표체화순화적방법,획득적VEGFR-2포외구공능편단가용우항VEGFR-2항체효개적검측.
