中国医药导报
中國醫藥導報
중국의약도보
CHINA MEDICAL HERALD
2013年
30期
16-19
,共4页
眭蕊%刘群%李锐锐%苗劲蔚
眭蕊%劉群%李銳銳%苗勁蔚
휴예%류군%리예예%묘경위
成纤维细胞生长因子-9%慢病毒%肿瘤
成纖維細胞生長因子-9%慢病毒%腫瘤
성섬유세포생장인자-9%만병독%종류
FGF-9%Lentiviral vector%Tumor
目的 构建人成纤维细胞生长因子-9 (FGF-9)慢病毒表达载体,鉴定其表达,并对慢病毒载体进行包装,为在体及体外研究FGF-9的功能及其与肿瘤等疾病的关系提供基础.方法 PCR扩增人FGF-9基因.全长序列交换入线性表达载体,连接产物转化感受态细胞,PCR及基因测序鉴定阳性克隆.重组质粒转染293T细胞,荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白(eGFP)表达,Western-blot鉴定FGF-9表达.重组病毒质粒在脂质体介导下与结构质粒和包膜质粒共转染293T细胞包装成人FGF-9过表达慢病毒,RT-qPCR测定滴度.结果 PCR及测序证实人FGF-9基因正确克隆至病毒质粒;感染293T细胞后,荧光显微镜观察到eGFP,Western-blot检测到FGF-9融合蛋白表达;三质粒共转染293T细胞获得慢病毒,测其浓度为2×108TU/mL.结论 成功构建人FGF-9慢病毒表达载体,可在293T细胞中表达,并包装成慢病毒,为在体及体外研究FGF-9的功能及其与肿瘤等疾病的关系提供基础.
目的 構建人成纖維細胞生長因子-9 (FGF-9)慢病毒錶達載體,鑒定其錶達,併對慢病毒載體進行包裝,為在體及體外研究FGF-9的功能及其與腫瘤等疾病的關繫提供基礎.方法 PCR擴增人FGF-9基因.全長序列交換入線性錶達載體,連接產物轉化感受態細胞,PCR及基因測序鑒定暘性剋隆.重組質粒轉染293T細胞,熒光顯微鏡觀察增彊型綠色熒光蛋白(eGFP)錶達,Western-blot鑒定FGF-9錶達.重組病毒質粒在脂質體介導下與結構質粒和包膜質粒共轉染293T細胞包裝成人FGF-9過錶達慢病毒,RT-qPCR測定滴度.結果 PCR及測序證實人FGF-9基因正確剋隆至病毒質粒;感染293T細胞後,熒光顯微鏡觀察到eGFP,Western-blot檢測到FGF-9融閤蛋白錶達;三質粒共轉染293T細胞穫得慢病毒,測其濃度為2×108TU/mL.結論 成功構建人FGF-9慢病毒錶達載體,可在293T細胞中錶達,併包裝成慢病毒,為在體及體外研究FGF-9的功能及其與腫瘤等疾病的關繫提供基礎.
목적 구건인성섬유세포생장인자-9 (FGF-9)만병독표체재체,감정기표체,병대만병독재체진행포장,위재체급체외연구FGF-9적공능급기여종류등질병적관계제공기출.방법 PCR확증인FGF-9기인.전장서렬교환입선성표체재체,련접산물전화감수태세포,PCR급기인측서감정양성극륭.중조질립전염293T세포,형광현미경관찰증강형록색형광단백(eGFP)표체,Western-blot감정FGF-9표체.중조병독질립재지질체개도하여결구질립화포막질립공전염293T세포포장성인FGF-9과표체만병독,RT-qPCR측정적도.결과 PCR급측서증실인FGF-9기인정학극륭지병독질립;감염293T세포후,형광현미경관찰도eGFP,Western-blot검측도FGF-9융합단백표체;삼질립공전염293T세포획득만병독,측기농도위2×108TU/mL.결론 성공구건인FGF-9만병독표체재체,가재293T세포중표체,병포장성만병독,위재체급체외연구FGF-9적공능급기여종류등질병적관계제공기출.
