眼科研究
眼科研究
안과연구
CHINESE OPHTHALMIC RESEARCH
2002年
3期
214-217
,共4页
李惠明%徐萍%王丰%田毓华%李川源%黄倩%樊莹
李惠明%徐萍%王豐%田毓華%李川源%黃倩%樊瑩
리혜명%서평%왕봉%전육화%리천원%황천%번형
睫状神经营养因子%基因%转染%表达%细胞株
睫狀神經營養因子%基因%轉染%錶達%細胞株
첩상신경영양인자%기인%전염%표체%세포주
目的建立能稳定且高水平表达人睫状神经营养因子(CNTF)的永久细胞株.方法采用阳离子脂质体介导CNTF表达质粒转染C2C12、NIH3T3、HLF、CRL-2302细胞,经氨甲喋呤筛选出抗性克隆后,分别采用原位杂交检测细胞中CNTFmRNA的表达,采用免疫组织化学染色、Western blot方法检测细胞浆中CNTF蛋白质的表达,采用ELISA法检测培养液中CNTF的分泌水平.结果不同的克隆产生和分泌CNTF的能力不同,但其中产生和分泌CNTF能力最强的克隆其培养液中CNTF的质量浓度分别是C2C12-CNTF 11 400pg/ml、NIH3T3-CNTF 9 069.071 pg/ml、HLF-CNTF 91 046.15 pg/ml及CRL-2302-CNTF77 578.4 pg/ml.结论构建的多株细胞株均能持续、稳定、高水平表达和分泌CNTF.
目的建立能穩定且高水平錶達人睫狀神經營養因子(CNTF)的永久細胞株.方法採用暘離子脂質體介導CNTF錶達質粒轉染C2C12、NIH3T3、HLF、CRL-2302細胞,經氨甲喋呤篩選齣抗性剋隆後,分彆採用原位雜交檢測細胞中CNTFmRNA的錶達,採用免疫組織化學染色、Western blot方法檢測細胞漿中CNTF蛋白質的錶達,採用ELISA法檢測培養液中CNTF的分泌水平.結果不同的剋隆產生和分泌CNTF的能力不同,但其中產生和分泌CNTF能力最彊的剋隆其培養液中CNTF的質量濃度分彆是C2C12-CNTF 11 400pg/ml、NIH3T3-CNTF 9 069.071 pg/ml、HLF-CNTF 91 046.15 pg/ml及CRL-2302-CNTF77 578.4 pg/ml.結論構建的多株細胞株均能持續、穩定、高水平錶達和分泌CNTF.
목적건립능은정차고수평표체인첩상신경영양인자(CNTF)적영구세포주.방법채용양리자지질체개도CNTF표체질립전염C2C12、NIH3T3、HLF、CRL-2302세포,경안갑첩령사선출항성극륭후,분별채용원위잡교검측세포중CNTFmRNA적표체,채용면역조직화학염색、Western blot방법검측세포장중CNTF단백질적표체,채용ELISA법검측배양액중CNTF적분비수평.결과불동적극륭산생화분비CNTF적능력불동,단기중산생화분비CNTF능력최강적극륭기배양액중CNTF적질량농도분별시C2C12-CNTF 11 400pg/ml、NIH3T3-CNTF 9 069.071 pg/ml、HLF-CNTF 91 046.15 pg/ml급CRL-2302-CNTF77 578.4 pg/ml.결론구건적다주세포주균능지속、은정、고수평표체화분비CNTF.
