四川大学学报（自然科学版）
四川大學學報（自然科學版）
사천대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE EDITION）
2013年
3期
655-660
,共6页
施慧敏%吴兰%赵梓亦%吴传芳
施慧敏%吳蘭%趙梓亦%吳傳芳
시혜민%오란%조재역%오전방
Tat%p21蛋白%A549细胞
Tat%p21蛋白%A549細胞
Tat%p21단백%A549세포
在本研究中,通过分子克隆的手段,将编码Tat跨膜转运结构域的CDS与人野生型p21蛋白的CDS相连接,并通过原核表达系统表达纯化相应蛋白；然后用该蛋白按浓度梯度:100,200,400,800,1000 nmol/L与A549细胞共同孵育,各浓度在10,60,120,240 min终止反应,通过Western Blotting检测进入细胞的p21蛋白量,以此确定最佳的转导条件；接着检测了转导进入A549细胞的Tat-p21融合蛋白在细胞中稳定存在的时间.然后通过绘制细胞生长曲线的方法比较了转导Tat-p21的细胞与负对照实验组生长速度的区别.结果发现,融合Tat跨膜结构域的p21蛋白能够高效进入A549细胞,并在细胞内发挥相应生物学功能,使细胞的生长受到抑制,增殖减慢；而作为负对照的p21蛋白则无相应功能.
在本研究中,通過分子剋隆的手段,將編碼Tat跨膜轉運結構域的CDS與人野生型p21蛋白的CDS相連接,併通過原覈錶達繫統錶達純化相應蛋白；然後用該蛋白按濃度梯度:100,200,400,800,1000 nmol/L與A549細胞共同孵育,各濃度在10,60,120,240 min終止反應,通過Western Blotting檢測進入細胞的p21蛋白量,以此確定最佳的轉導條件；接著檢測瞭轉導進入A549細胞的Tat-p21融閤蛋白在細胞中穩定存在的時間.然後通過繪製細胞生長麯線的方法比較瞭轉導Tat-p21的細胞與負對照實驗組生長速度的區彆.結果髮現,融閤Tat跨膜結構域的p21蛋白能夠高效進入A549細胞,併在細胞內髮揮相應生物學功能,使細胞的生長受到抑製,增殖減慢；而作為負對照的p21蛋白則無相應功能.
재본연구중,통과분자극륭적수단,장편마Tat과막전운결구역적CDS여인야생형p21단백적CDS상련접,병통과원핵표체계통표체순화상응단백；연후용해단백안농도제도:100,200,400,800,1000 nmol/L여A549세포공동부육,각농도재10,60,120,240 min종지반응,통과Western Blotting검측진입세포적p21단백량,이차학정최가적전도조건；접착검측료전도진입A549세포적Tat-p21융합단백재세포중은정존재적시간.연후통과회제세포생장곡선적방법비교료전도Tat-p21적세포여부대조실험조생장속도적구별.결과발현,융합Tat과막결구역적p21단백능구고효진입A549세포,병재세포내발휘상응생물학공능,사세포적생장수도억제,증식감만；이작위부대조적p21단백칙무상응공능.
