河北大学学报（自然科学版）
河北大學學報（自然科學版）
하북대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF HEBEI UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2013年
3期
258-263
,共6页
成永强%贾海莲%唐志远%赵晶晶%李正平
成永彊%賈海蓮%唐誌遠%趙晶晶%李正平
성영강%가해련%당지원%조정정%리정평
分析化学%microRNA%滚环扩增%阳离子共轭聚合物%荧光共振能量转移(FRET)
分析化學%microRNA%滾環擴增%暘離子共軛聚閤物%熒光共振能量轉移(FRET)
분석화학%microRNA%곤배확증%양리자공액취합물%형광공진능량전이(FRET)
结合恒温滚环扩增(rolling circle amlification,RCA)、单链特异性核酸外切酶工(exonuclease Ⅰ,Exo Ⅰ)和阳离子共轭聚合物(Cationic conjugated polymer,CCP)荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术,建立了一种特异、灵敏的均相检测microRNA(miRNA)的新方法.该方法应用荧光标记探针与RCA扩增的长链DNA产物杂交,当加入CCP时,其与杂交的标记探针通过静电力结合,发生高效的FRET.未杂交的标记探针利用Exo Ⅰ水解成单核苷酸,其与CCP相互作用力弱,不能发生有效的FRET.基于此,无需分离和洗涤步骤,实现了RCA扩增miRNA的均相检测.方法特异性好,灵敏度高,线性为0.5～20 pmol/L,检出限为0.2 pmol/L.方法为miRNA均相检测和原位成像分析以及临床诊断提供了新策略.
結閤恆溫滾環擴增(rolling circle amlification,RCA)、單鏈特異性覈痠外切酶工(exonuclease Ⅰ,Exo Ⅰ)和暘離子共軛聚閤物(Cationic conjugated polymer,CCP)熒光共振能量轉移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技術,建立瞭一種特異、靈敏的均相檢測microRNA(miRNA)的新方法.該方法應用熒光標記探針與RCA擴增的長鏈DNA產物雜交,噹加入CCP時,其與雜交的標記探針通過靜電力結閤,髮生高效的FRET.未雜交的標記探針利用Exo Ⅰ水解成單覈苷痠,其與CCP相互作用力弱,不能髮生有效的FRET.基于此,無需分離和洗滌步驟,實現瞭RCA擴增miRNA的均相檢測.方法特異性好,靈敏度高,線性為0.5～20 pmol/L,檢齣限為0.2 pmol/L.方法為miRNA均相檢測和原位成像分析以及臨床診斷提供瞭新策略.
결합항온곤배확증(rolling circle amlification,RCA)、단련특이성핵산외절매공(exonuclease Ⅰ,Exo Ⅰ)화양리자공액취합물(Cationic conjugated polymer,CCP)형광공진능량전이(fluorescence resonance energy transfer,FRET)기술,건립료일충특이、령민적균상검측microRNA(miRNA)적신방법.해방법응용형광표기탐침여RCA확증적장련DNA산물잡교,당가입CCP시,기여잡교적표기탐침통과정전력결합,발생고효적FRET.미잡교적표기탐침이용Exo Ⅰ수해성단핵감산,기여CCP상호작용력약,불능발생유효적FRET.기우차,무수분리화세조보취,실현료RCA확증miRNA적균상검측.방법특이성호,령민도고,선성위0.5～20 pmol/L,검출한위0.2 pmol/L.방법위miRNA균상검측화원위성상분석이급림상진단제공료신책략.
