CAJ | 학술논문

核糖体蛋白除组成核糖体、参与蛋白质合成之外,还作用于细胞的分裂、增殖、分化、凋亡、发育调控等过程.为了研究核糖体蛋白基因在刺参中的生理功能,本研究采用全长cDNA克隆技术首次从刺参(Apostichopus japonicus)体壁中克隆出核糖体蛋白L17基因(ribosomal protein L 17,RPL17)的全长cDNA序列(GenBank登录号:JQ922561).该基因cDNA全长643 bp,包括33 bp的5’-UTR,58 bp的3’-UTR,开放阅读框552 bp,编码183个氨基酸,编码的蛋白质相对分子量为21.5010kD,理论等电点(pI)为10.29,总平均亲水性(GRAVY)为-0.964,为不稳定的亲水蛋白.在NCBI网站上经Blastn和Blastx比对分析,发现该序列的核苷酸序列以及推导的氨基酸序列与其他物种的同源性均在70％以上,其中与紫海胆(Stron-gylocentrotus purpuratus)的同源性分别为75％和81％.二级结构预测结果:α螺旋占36.61％;β折叠占7.65％；无规卷曲占42.08％;其余13.66％为延伸链.蛋白功能位点分析显示其含有1个核糖体蛋白L22信号位点和9个磷酸化位点,其中cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点3个,蛋白激酶C磷酸化位点4个,酪氨酸激酶Ⅱ磷酸化位点2个.构建的系统进化树显示,刺参与同为棘皮动物的紫海胆聚为一支,分子进化地位上关系最近,其次聚类顺序较近的为玻璃海鞘、非洲爪蟾,脊椎动物聚为一支,该结果与这些物种在生物学上的分类是较一致的.利用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测RPL17基因在刺参各组织中的表达,结果表明,RPL17基因在体腔细胞中表达量最高,肠中次之,呼吸树中最低.体腔细胞中的表达量分别为肠、体壁、纵肌、呼吸树的5.67、21.63、43.25和346倍,与4种组织的差异均极显著(P＜0.01).另外,肠与呼吸树中的表达量差异显著(P＜0.05),其余组织差异不显著(P＞0.05).本研究结果将为进一步研究刺参蛋白质合成、再生及多种生理活动的调控机制提供基础数据. 覈糖體蛋白除組成覈糖體、參與蛋白質閤成之外,還作用于細胞的分裂、增殖、分化、凋亡、髮育調控等過程.為瞭研究覈糖體蛋白基因在刺參中的生理功能,本研究採用全長cDNA剋隆技術首次從刺參(Apostichopus japonicus)體壁中剋隆齣覈糖體蛋白L17基因(ribosomal protein L 17,RPL17)的全長cDNA序列(GenBank登錄號:JQ922561).該基因cDNA全長643 bp,包括33 bp的5’-UTR,58 bp的3’-UTR,開放閱讀框552 bp,編碼183箇氨基痠,編碼的蛋白質相對分子量為21.5010kD,理論等電點(pI)為10.29,總平均親水性(GRAVY)為-0.964,為不穩定的親水蛋白.在NCBI網站上經Blastn和Blastx比對分析,髮現該序列的覈苷痠序列以及推導的氨基痠序列與其他物種的同源性均在70％以上,其中與紫海膽(Stron-gylocentrotus purpuratus)的同源性分彆為75％和81％.二級結構預測結果:α螺鏇佔36.61％;β摺疊佔7.65％；無規捲麯佔42.08％;其餘13.66％為延伸鏈.蛋白功能位點分析顯示其含有1箇覈糖體蛋白L22信號位點和9箇燐痠化位點,其中cAMP和cGMP依賴性蛋白激酶燐痠化位點3箇,蛋白激酶C燐痠化位點4箇,酪氨痠激酶Ⅱ燐痠化位點2箇.構建的繫統進化樹顯示,刺參與同為棘皮動物的紫海膽聚為一支,分子進化地位上關繫最近,其次聚類順序較近的為玻璃海鞘、非洲爪蟾,脊椎動物聚為一支,該結果與這些物種在生物學上的分類是較一緻的.利用熒光定量PCR(qRT-PCR)技術檢測RPL17基因在刺參各組織中的錶達,結果錶明,RPL17基因在體腔細胞中錶達量最高,腸中次之,呼吸樹中最低.體腔細胞中的錶達量分彆為腸、體壁、縱肌、呼吸樹的5.67、21.63、43.25和346倍,與4種組織的差異均極顯著(P＜0.01).另外,腸與呼吸樹中的錶達量差異顯著(P＜0.05),其餘組織差異不顯著(P＞0.05).本研究結果將為進一步研究刺參蛋白質閤成、再生及多種生理活動的調控機製提供基礎數據.
핵당체단백제조성핵당체、삼여단백질합성지외,환작용우세포적분렬、증식、분화、조망、발육조공등과정.위료연구핵당체단백기인재자삼중적생리공능,본연구채용전장cDNA극륭기술수차종자삼(Apostichopus japonicus)체벽중극륭출핵당체단백L17기인(ribosomal protein L 17,RPL17)적전장cDNA서렬(GenBank등록호:JQ922561).해기인cDNA전장643 bp,포괄33 bp적5’-UTR,58 bp적3’-UTR,개방열독광552 bp,편마183개안기산,편마적단백질상대분자량위21.5010kD,이론등전점(pI)위10.29,총평균친수성(GRAVY)위-0.964,위불은정적친수단백.재NCBI망참상경Blastn화Blastx비대분석,발현해서렬적핵감산서렬이급추도적안기산서렬여기타물충적동원성균재70％이상,기중여자해담(Stron-gylocentrotus purpuratus)적동원성분별위75％화81％.이급결구예측결과:α라선점36.61％;β절첩점7.65％；무규권곡점42.08％;기여13.66％위연신련.단백공능위점분석현시기함유1개핵당체단백L22신호위점화9개린산화위점,기중cAMP화cGMP의뢰성단백격매린산화위점3개,단백격매C린산화위점4개,락안산격매Ⅱ린산화위점2개.구건적계통진화수현시,자삼여동위극피동물적자해담취위일지,분자진화지위상관계최근,기차취류순서교근적위파리해초、비주조섬,척추동물취위일지,해결과여저사물충재생물학상적분류시교일치적.이용형광정량PCR(qRT-PCR)기술검측RPL17기인재자삼각조직중적표체,결과표명,RPL17기인재체강세포중표체량최고,장중차지,호흡수중최저.체강세포중적표체량분별위장、체벽、종기、호흡수적5.67、21.63、43.25화346배,여4충조직적차이균겁현저(P＜0.01).령외,장여호흡수중적표체량차이현저(P＜0.05),기여조직차이불현저(P＞0.05).본연구결과장위진일보연구자삼단백질합성、재생급다충생리활동적조공궤제제공기출수거.