CAJ | 학술논문

柚皮苷是一种双氢黄酮类化合物的苦味剂,鼠李糖基转移酶是柚皮苷的合成过程中的关键酶.本研究通过RT-PCR方法从梁平柚(Citru maxima cv.Liangping)扩增到鼠李糖基转移酶(Cm1,2RhaT)基因,构建了该基因的原核表达载体pET28a-CmRhaT并转化到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21 (DE3)中,诱导表达并分离纯化得到融合蛋白.利用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测Cm1,2RhaT基因在梁平柚等5个柑橘品种叶片、果实及不同发育时期的表达差异.研究结果获得Cm1,2RhaT的DNA和cDNA序列(GenBank登录号:JQ217381),cDNA长1 436 bp,推测的编码蛋白Cm1,2RhaT包含453个氨基酸,理论分子量为51.2 kD.分离纯化得到了较高浓度(0.526 mg/mL)和纯度(95％)的融合蛋白.定量分析表明,该基因在梁平柚的果实和叶片中均有表达.从开花后30～180 d,该基因的表达量总体上随着果实的成熟而逐渐降低.其同源基因在其它品种中也呈现和梁平柚基本一致的波动性表达模式.本研究从梁平柚中扩增出一个Cm1,2RhaT基因,其表达的酶具有典型的糖基转移基团,是柑橘苦味物质之一黄烷酮合成中的关键酶,参与柑橘次生代谢过程,可能是无苦味柑橘品种改良的一个切入点.
유피감시일충쌍경황동류화합물적고미제,서리당기전이매시유피감적합성과정중적관건매.본연구통과RT-PCR방법종량평유(Citru maxima cv.Liangping)확증도서리당기전이매(Cm1,2RhaT)기인,구건료해기인적원핵표체재체pET28a-CmRhaT병전화도대장간균(Escherichia coli)BL21 (DE3)중,유도표체병분리순화득도융합단백.이용SYBR Green Ⅰ실시형광정량PCR검측Cm1,2RhaT기인재량평유등5개감귤품충협편、과실급불동발육시기적표체차이.연구결과획득Cm1,2RhaT적DNA화cDNA서렬(GenBank등록호:JQ217381),cDNA장1 436 bp,추측적편마단백Cm1,2RhaT포함453개안기산,이론분자량위51.2 kD.분리순화득도료교고농도(0.526 mg/mL)화순도(95％)적융합단백.정량분석표명,해기인재량평유적과실화협편중균유표체.종개화후30～180 d,해기인적표체량총체상수착과실적성숙이축점강저.기동원기인재기타품충중야정현화량평유기본일치적파동성표체모식.본연구종량평유중확증출일개Cm1,2RhaT기인,기표체적매구유전형적당기전이기단,시감귤고미물질지일황완동합성중적관건매,삼여감귤차생대사과정,가능시무고미감귤품충개량적일개절입점.