CAJ | 학술논문

目的:评价鞘内注射功能化单壁碳纳米管shRNA干扰质粒复合物对福尔马林炎性痛小鼠的基因沉默效果.方法:先将整合了NR2B目的基因的pYr-1.1-hU6-EGFP(带绿色荧光)质粒进行扩增,抽提,消毒浓缩,浓度纯度测定,以获得高纯度、高浓度的NR2B-shRNA干扰质粒；将难溶于水的单壁碳纳米管用表面活性剂十六浣基三甲基溴化铵(CTAB)和超声振荡法制备成功能化单壁碳纳米管(f-SWNT)混悬液,通过凝胶成像系统检测功能化单壁碳纳米管与NR2B-shRNA的结合情况;选取雄性清洁级成年C57BL/6小鼠40只,体重18 ～ 23 kg,随机分为5组(n=8)∶空白组(C组),假手术组(S组),实验组(A组),阳性对照组(P组),阴性对照组(N组)；分别行鞘内注射,7天后建立福尔马林炎性痛小鼠模型,测定术后lh自发痛行为学改变,职脊髓L4～6节段采用RT-PCR法检测NR2BmRNA表达.结果:获得能够稳定表达的NR2B-shRNA干扰质粒；表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)修饰单壁碳纳米管能形成较稳定的功能化单壁碳纳米管混悬液；功能化单壁碳纳米管能与NR2B-shRNA干扰质粒很好地结合,其结合最佳质量比为1∶3.5；对于福尔马林所致的Ⅰ相急性痛,所有组间的急性期伤害性反应无差别(P＞0.05),阳性对照组(P组)和实验组(A组)小鼠对福尔马林所致的Ⅱ相持续痛的伤害性反应显著降低(P＜ 0.02)；阳性对照组(P组)和实验组(A组)小鼠脊髓NR2BmRNA表达均低于其他对照组(P＜0.05).结论:功能化单壁碳纳米管能与NR2B-shRNA干扰质粒很好地结合形成功能化单壁碳纳米管/NR2B-shRNA干扰质粒复合物；鞘内注射功能化单壁碳纳米管用作基因载体能有效转染NR2B-shRNA干扰质粒复合物行NR2B基因沉默,抑制小鼠脊髓NR2B基因表达,减轻福尔马林Ⅱ相痛行为学.
목적:평개초내주사공능화단벽탄납미관shRNA간우질립복합물대복이마림염성통소서적기인침묵효과.방법:선장정합료NR2B목적기인적pYr-1.1-hU6-EGFP(대록색형광)질립진행확증,추제,소독농축,농도순도측정,이획득고순도、고농도적NR2B-shRNA간우질립；장난용우수적단벽탄납미관용표면활성제십륙완기삼갑기추화안(CTAB)화초성진탕법제비성공능화단벽탄납미관(f-SWNT)혼현액,통과응효성상계통검측공능화단벽탄납미관여NR2B-shRNA적결합정황;선취웅성청길급성년C57BL/6소서40지,체중18 ～ 23 kg,수궤분위5조(n=8)∶공백조(C조),가수술조(S조),실험조(A조),양성대조조(P조),음성대조조(N조)；분별행초내주사,7천후건립복이마림염성통소서모형,측정술후lh자발통행위학개변,직척수L4～6절단채용RT-PCR법검측NR2BmRNA표체.결과:획득능구은정표체적NR2B-shRNA간우질립；표면활성제십륙완기삼갑기추화안(CTAB)수식단벽탄납미관능형성교은정적공능화단벽탄납미관혼현액；공능화단벽탄납미관능여NR2B-shRNA간우질립흔호지결합,기결합최가질량비위1∶3.5；대우복이마림소치적Ⅰ상급성통,소유조간적급성기상해성반응무차별(P＞0.05),양성대조조(P조)화실험조(A조)소서대복이마림소치적Ⅱ상지속통적상해성반응현저강저(P＜ 0.02)；양성대조조(P조)화실험조(A조)소서척수NR2BmRNA표체균저우기타대조조(P＜0.05).결론:공능화단벽탄납미관능여NR2B-shRNA간우질립흔호지결합형성공능화단벽탄납미관/NR2B-shRNA간우질립복합물；초내주사공능화단벽탄납미관용작기인재체능유효전염NR2B-shRNA간우질립복합물행NR2B기인침묵,억제소서척수NR2B기인표체,감경복이마림Ⅱ상통행위학.