医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2013年
2期
80-84
,共5页
颜玉玲%翁敏杰%杜建霖%佘强
顏玉玲%翁敏傑%杜建霖%佘彊
안옥령%옹민걸%두건림%사강
Tbx18-Cre基因敲入小鼠%整合位点%谱系示踪
Tbx18-Cre基因敲入小鼠%整閤位點%譜繫示蹤
Tbx18-Cre기인고입소서%정합위점%보계시종
目的 揭示Tbx18-Cre基因敲入小鼠Cre基因表达的保真性.方法用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)快速检测基因敲入小鼠外源基因Cre的相对拷贝数;Junction PCR验证基因敲入小鼠整合位点Tbx18-Cre的纯合性;利用Tbx18 Cre-/-纯合子小鼠模型验证Cre基因对下游基因的影响;利用Tbx18-Cre/Rosa26R-LacZ示踪模型,通过检测LacZ的表达,验证Cre基因的时空保真性.结果 实时荧光定量PCR验证Tbx18基因敲入小鼠外源基因Cre的相对拷贝数准确,Junction PCR验证其整合位点特异.Tbx18 Cre-/-纯合子小鼠模型能特异性阻断转录因子Tbx18的表达,引起信号下游基因CX40、CX43、CX45的表达明显升高.Tbx18-Cre/Rosa26R-LacZ示踪模型LacZ蛋白表达部位与Tbx18 mRNA表达部位一致.结论 Tbx18-Cre基因敲入小鼠中Cre基因具有高度准确的时空保真性和特异性.
目的 揭示Tbx18-Cre基因敲入小鼠Cre基因錶達的保真性.方法用實時熒光定量PCR(Real-time PCR)快速檢測基因敲入小鼠外源基因Cre的相對拷貝數;Junction PCR驗證基因敲入小鼠整閤位點Tbx18-Cre的純閤性;利用Tbx18 Cre-/-純閤子小鼠模型驗證Cre基因對下遊基因的影響;利用Tbx18-Cre/Rosa26R-LacZ示蹤模型,通過檢測LacZ的錶達,驗證Cre基因的時空保真性.結果 實時熒光定量PCR驗證Tbx18基因敲入小鼠外源基因Cre的相對拷貝數準確,Junction PCR驗證其整閤位點特異.Tbx18 Cre-/-純閤子小鼠模型能特異性阻斷轉錄因子Tbx18的錶達,引起信號下遊基因CX40、CX43、CX45的錶達明顯升高.Tbx18-Cre/Rosa26R-LacZ示蹤模型LacZ蛋白錶達部位與Tbx18 mRNA錶達部位一緻.結論 Tbx18-Cre基因敲入小鼠中Cre基因具有高度準確的時空保真性和特異性.
목적 게시Tbx18-Cre기인고입소서Cre기인표체적보진성.방법용실시형광정량PCR(Real-time PCR)쾌속검측기인고입소서외원기인Cre적상대고패수;Junction PCR험증기인고입소서정합위점Tbx18-Cre적순합성;이용Tbx18 Cre-/-순합자소서모형험증Cre기인대하유기인적영향;이용Tbx18-Cre/Rosa26R-LacZ시종모형,통과검측LacZ적표체,험증Cre기인적시공보진성.결과 실시형광정량PCR험증Tbx18기인고입소서외원기인Cre적상대고패수준학,Junction PCR험증기정합위점특이.Tbx18 Cre-/-순합자소서모형능특이성조단전록인자Tbx18적표체,인기신호하유기인CX40、CX43、CX45적표체명현승고.Tbx18-Cre/Rosa26R-LacZ시종모형LacZ단백표체부위여Tbx18 mRNA표체부위일치.결론 Tbx18-Cre기인고입소서중Cre기인구유고도준학적시공보진성화특이성.
