胃肠病学和肝病学杂志
胃腸病學和肝病學雜誌
위장병학화간병학잡지
CHINESE JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY AND HEPATOLOGY
2013年
6期
545-548
,共4页
周珍珍%邓欢%黄焕军%夏羽佳%涂炜%何嘉怡%田德安
週珍珍%鄧歡%黃煥軍%夏羽佳%塗煒%何嘉怡%田德安
주진진%산환%황환군%하우가%도위%하가이%전덕안
肝细胞癌%MTDH%骨架重排%小干扰RNA%HepG2
肝細胞癌%MTDH%骨架重排%小榦擾RNA%HepG2
간세포암%MTDH%골가중배%소간우RNA%HepG2
目的 构建人MTDH基因的shRNA干扰载体,并观察其对原发性肝癌细胞HepG2骨架重排的影响.方法 针对MTDH基因的不同部位设计3对shRNA的寡核苷酸片段,克隆到载体pGCsilencerTM H1/Neo中,RT-PCR、Western blotting及免疫荧光检测转染后MTDH mRNA和蛋白表达变化情况,并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体,并将其转染人原发性肝癌细胞HepG2,用罗丹明标记的鬼笔环肽显示沉默MTDH基因后对人原发性肝癌细胞HepG2骨架蛋白F_actin的改变.结果 靶向MTDH干扰质粒构建成功.与转空载体的阴性对照组及未转染组比较,转染pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-shRNA后,HepG2中MTDH mRNA和蛋白表达明显降低,其中以pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-S1最为明显,达到90%以上;细胞形态及细胞骨架显示转染pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-S1的细胞骨架蛋白F_actin发生重排.结论 成功构建并筛选最佳抑制效率的靶向MTDH干扰pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-S1,该载体能有效重排肝癌细胞骨架.
目的 構建人MTDH基因的shRNA榦擾載體,併觀察其對原髮性肝癌細胞HepG2骨架重排的影響.方法 針對MTDH基因的不同部位設計3對shRNA的寡覈苷痠片段,剋隆到載體pGCsilencerTM H1/Neo中,RT-PCR、Western blotting及免疫熒光檢測轉染後MTDH mRNA和蛋白錶達變化情況,併篩選最佳抑製效率的shRNA榦擾載體,併將其轉染人原髮性肝癌細胞HepG2,用囉丹明標記的鬼筆環肽顯示沉默MTDH基因後對人原髮性肝癌細胞HepG2骨架蛋白F_actin的改變.結果 靶嚮MTDH榦擾質粒構建成功.與轉空載體的陰性對照組及未轉染組比較,轉染pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-shRNA後,HepG2中MTDH mRNA和蛋白錶達明顯降低,其中以pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-S1最為明顯,達到90%以上;細胞形態及細胞骨架顯示轉染pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-S1的細胞骨架蛋白F_actin髮生重排.結論 成功構建併篩選最佳抑製效率的靶嚮MTDH榦擾pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-S1,該載體能有效重排肝癌細胞骨架.
목적 구건인MTDH기인적shRNA간우재체,병관찰기대원발성간암세포HepG2골가중배적영향.방법 침대MTDH기인적불동부위설계3대shRNA적과핵감산편단,극륭도재체pGCsilencerTM H1/Neo중,RT-PCR、Western blotting급면역형광검측전염후MTDH mRNA화단백표체변화정황,병사선최가억제효솔적shRNA간우재체,병장기전염인원발성간암세포HepG2,용라단명표기적귀필배태현시침묵MTDH기인후대인원발성간암세포HepG2골가단백F_actin적개변.결과 파향MTDH간우질립구건성공.여전공재체적음성대조조급미전염조비교,전염pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-shRNA후,HepG2중MTDH mRNA화단백표체명현강저,기중이pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-S1최위명현,체도90%이상;세포형태급세포골가현시전염pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-S1적세포골가단백F_actin발생중배.결론 성공구건병사선최가억제효솔적파향MTDH간우pGCsilencerTM H1/Neo-MTDH-S1,해재체능유효중배간암세포골가.
