大连医科大学学报
大連醫科大學學報
대련의과대학학보
JOURNAL OF DALIAN MEDICAL UNIVERSITY
2013年
3期
218-222
,共5页
王嘉盛%刘淑清%郭春梅%孙明忠
王嘉盛%劉淑清%郭春梅%孫明忠
왕가성%류숙청%곽춘매%손명충
ANXA11%淋巴道转移%Hca-P%RNA干扰
ANXA11%淋巴道轉移%Hca-P%RNA榦擾
ANXA11%림파도전이%Hca-P%RNA간우
目的构建针对膜联蛋白A11(Annexin A11,ANXA11) 的shRNA(small hairpin RNA),稳定转染小鼠低淋巴道转移力肝癌Hca-P细胞,筛选ANXA11稳定下调的单克隆细胞株,为后续研究奠定基础.方法 合成2条ANXA11的shRNA序列(shRNA-1和-2),与真核表达载体pGPU6/GFP/Neo连接,构建pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ANXA11表达载体并转染Hca-P细胞,通过G418筛选及有限稀释法获得单克隆细胞株,Western blot检测Hca-P细胞ANXA11蛋白表达,并与空载体转染及对照组比较.结果成功构建了pGPU6/GFP/Neo-shRNA- ANXA11重组表达质粒,并获得pGPU6/GFP/Neo- shRNA- ANXA11-Hca-P单克隆细胞株;shRNA-1重组质粒的抑制效果在mRNA和蛋白水平对ANXA11抑制率分别为80.2%和77.7%,P<0.01.结论 通过RNA干扰和基因转染技术成功建立了ANXA11表达稳定下调的Hca-P细胞株,得到了其单克隆细胞株,为进一步研究ANXA11在恶性肿瘤淋巴道转移中的作用及机制打下了基础.
目的構建針對膜聯蛋白A11(Annexin A11,ANXA11) 的shRNA(small hairpin RNA),穩定轉染小鼠低淋巴道轉移力肝癌Hca-P細胞,篩選ANXA11穩定下調的單剋隆細胞株,為後續研究奠定基礎.方法 閤成2條ANXA11的shRNA序列(shRNA-1和-2),與真覈錶達載體pGPU6/GFP/Neo連接,構建pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ANXA11錶達載體併轉染Hca-P細胞,通過G418篩選及有限稀釋法穫得單剋隆細胞株,Western blot檢測Hca-P細胞ANXA11蛋白錶達,併與空載體轉染及對照組比較.結果成功構建瞭pGPU6/GFP/Neo-shRNA- ANXA11重組錶達質粒,併穫得pGPU6/GFP/Neo- shRNA- ANXA11-Hca-P單剋隆細胞株;shRNA-1重組質粒的抑製效果在mRNA和蛋白水平對ANXA11抑製率分彆為80.2%和77.7%,P<0.01.結論 通過RNA榦擾和基因轉染技術成功建立瞭ANXA11錶達穩定下調的Hca-P細胞株,得到瞭其單剋隆細胞株,為進一步研究ANXA11在噁性腫瘤淋巴道轉移中的作用及機製打下瞭基礎.
목적구건침대막련단백A11(Annexin A11,ANXA11) 적shRNA(small hairpin RNA),은정전염소서저림파도전이력간암Hca-P세포,사선ANXA11은정하조적단극륭세포주,위후속연구전정기출.방법 합성2조ANXA11적shRNA서렬(shRNA-1화-2),여진핵표체재체pGPU6/GFP/Neo련접,구건pGPU6/GFP/Neo-shRNA-ANXA11표체재체병전염Hca-P세포,통과G418사선급유한희석법획득단극륭세포주,Western blot검측Hca-P세포ANXA11단백표체,병여공재체전염급대조조비교.결과성공구건료pGPU6/GFP/Neo-shRNA- ANXA11중조표체질립,병획득pGPU6/GFP/Neo- shRNA- ANXA11-Hca-P단극륭세포주;shRNA-1중조질립적억제효과재mRNA화단백수평대ANXA11억제솔분별위80.2%화77.7%,P<0.01.결론 통과RNA간우화기인전염기술성공건립료ANXA11표체은정하조적Hca-P세포주,득도료기단극륭세포주,위진일보연구ANXA11재악성종류림파도전이중적작용급궤제타하료기출.
