CAJ | 학술논문

目的观察来氟米特(leflunomide,LEF)在转化生长因子β1 (TGF-β1)刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMC)表达Smad2及Ⅳ型胶原(ColⅣ)过程中发挥的作用.方法建立体外培养大鼠肾小球系膜细胞模型,经鉴定后第7代用于实验.按照对大鼠肾小球系膜细胞模型处理方式不同,实验分4组,对照组(只加培养液),TGF-β1组(TGF-β1 5 ng/ml),LEF-1组(LEF 5 ng/ml+TGF-β1 5 ng/ml)和LEF-2组(LEF 50 ng/ml+TGF-β1 5 ng/ml).分别于15min、30min、1h、2h和6h收集标本,用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法测定细胞培养上清液的ColⅣ胶原蛋白表达量的变化.用间接免疫荧光法检测各组磷酸化Smad2 (P-Smad2)蛋白表达的变化；采用荧光半定量RT-PCR法检测各组Smad2 mRNA表达的变化.结果在各时间点,TGF-β1刺激组ColⅣ分泌量高于对照组(P＜0.05),LEF各组Ⅳ胶原分泌低于TGF-β1 (P ＜0.05).对照组P-Smad2蛋白有少量的表达；TGF-β1组表达升高,有统计学意义(P＜0.05),与TGF-β1组相比,两LEF组P-Smad2表达下降,有统计学意义(P＜0.05).肾小球系膜细胞中,TGF-β1组Smad2 mRNA表达高于对照组.LEF-1组和LEF-2组Smad2 mRNA表达水平低于TGF-β1组(P＜0.01).但两LEF组间比较无统计学意义(P＞0.05).LEF干预作用有时间性,随时间延长,其LEF干预作用逐渐减弱.结论经TGF-β1刺激后,体外培养的大鼠肾小球系膜细胞磷酸化-Smad2表达及Ⅳ胶原分泌增加,来氟米特可降低Smad2表达和Ⅳ胶原分泌水平,减轻细胞外基质(ECM)的沉积,为来氟米特的肾脏保护作用提供实验依据.
목적 관찰래불미특(leflunomide,LEF)재전화생장인자β1 (TGF-β1)자격대서신소구계막세포(GMC)표체Smad2급Ⅳ형효원(ColⅣ)과정중발휘적작용.방법 건입체외배양대서신소구계막세포모형,경감정후제7대용우실험.안조대대서신소구계막세포모형처리방식불동,실험분4조,대조조(지가배양액),TGF-β1조(TGF-β1 5 ng/ml),LEF-1조(LEF 5 ng/ml+TGF-β1 5 ng/ml)화LEF-2조(LEF 50 ng/ml+TGF-β1 5 ng/ml).분별우15min、30min、1h、2h화6h수집표본,용매련면역흡부측정(ELISA)방법측정세포배양상청액적ColⅣ효원단백표체량적변화.용간접면역형광법검측각조린산화Smad2 (P-Smad2)단백표체적변화；채용형광반정량RT-PCR법검측각조Smad2 mRNA표체적변화.결과 재각시간점,TGF-β1자격조ColⅣ분비량고우대조조(P＜0.05),LEF각조Ⅳ효원분비저우TGF-β1 (P ＜0.05).대조조P-Smad2단백유소량적표체；TGF-β1조표체승고,유통계학의의(P＜0.05),여TGF-β1조상비,량LEF조P-Smad2표체하강,유통계학의의(P＜0.05).신소구계막세포중,TGF-β1조Smad2 mRNA표체고우대조조.LEF-1조화LEF-2조Smad2 mRNA표체수평저우TGF-β1조(P＜0.01).단량LEF조간비교무통계학의의(P＞0.05).LEF간예작용유시간성,수시간연장,기LEF간예작용축점감약.결론 경TGF-β1자격후,체외배양적대서신소구계막세포린산화-Smad2표체급Ⅳ효원분비증가,래불미특가강저Smad2표체화Ⅳ효원분비수평,감경세포외기질(ECM)적침적,위래불미특적신장보호작용제공실험의거.