中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2013年
5期
923-927
,共5页
徐菁%覃艳红%张翠明%乔爱秀%李灵敏%王宏伟
徐菁%覃豔紅%張翠明%喬愛秀%李靈敏%王宏偉
서정%담염홍%장취명%교애수%리령민%왕굉위
WT1蛋白%蛋白异构体%白血病%细胞凋亡
WT1蛋白%蛋白異構體%白血病%細胞凋亡
WT1단백%단백이구체%백혈병%세포조망
目的:探讨WT1异构体比例改变对人白血病细胞株HL-60增殖和凋亡的影响.方法:逆转录获得人WT1(17AA-/KTS-)异构体全长cDNA序列,连接到PCDH1-MCS1-EF1-copGFP慢病毒质粒载体上,酶切和测序证实正确构建重组质粒,建立WT1异构体表达比例改变的单克隆细胞株.MTT法检测细胞增殖活性,形态学观察及Annexin Ⅴ检测细胞凋亡.结果:成功构建了真核表达载体PCDH1-MCS1-EF1-copGFP-WT1(17AA-/KTS-),转染HL-60细胞后,实时荧光定量RT-PCR和Western blotting显示重组质粒转染细胞中WT1(17AA-/KTS-)mRNA和蛋白水平明显高于空质粒转染组和正常对照组.重组质粒转染细胞的生长抑制率高于空质粒转染组和正常对照组,差异显著(P＜0.05).加2 μmol/L三氧化二砷(As2O3)培养48h后,形态学观察发现3组细胞都出现了凋亡形态,但重组质粒转染细胞更为明显.流式细胞术结果显示,As2O3作用24h后,重组质粒转染细胞凋亡率较空质粒转染组和正常对照组细胞升高,差异显著(P＜0.05).结论:增加外源性WT1(17AA-/KTS-)异构体的表达能抑制HL-60细胞增殖,促进As2O3诱导的细胞凋亡.
目的:探討WT1異構體比例改變對人白血病細胞株HL-60增殖和凋亡的影響.方法:逆轉錄穫得人WT1(17AA-/KTS-)異構體全長cDNA序列,連接到PCDH1-MCS1-EF1-copGFP慢病毒質粒載體上,酶切和測序證實正確構建重組質粒,建立WT1異構體錶達比例改變的單剋隆細胞株.MTT法檢測細胞增殖活性,形態學觀察及Annexin Ⅴ檢測細胞凋亡.結果:成功構建瞭真覈錶達載體PCDH1-MCS1-EF1-copGFP-WT1(17AA-/KTS-),轉染HL-60細胞後,實時熒光定量RT-PCR和Western blotting顯示重組質粒轉染細胞中WT1(17AA-/KTS-)mRNA和蛋白水平明顯高于空質粒轉染組和正常對照組.重組質粒轉染細胞的生長抑製率高于空質粒轉染組和正常對照組,差異顯著(P＜0.05).加2 μmol/L三氧化二砷(As2O3)培養48h後,形態學觀察髮現3組細胞都齣現瞭凋亡形態,但重組質粒轉染細胞更為明顯.流式細胞術結果顯示,As2O3作用24h後,重組質粒轉染細胞凋亡率較空質粒轉染組和正常對照組細胞升高,差異顯著(P＜0.05).結論:增加外源性WT1(17AA-/KTS-)異構體的錶達能抑製HL-60細胞增殖,促進As2O3誘導的細胞凋亡.
목적:탐토WT1이구체비례개변대인백혈병세포주HL-60증식화조망적영향.방법:역전록획득인WT1(17AA-/KTS-)이구체전장cDNA서렬,련접도PCDH1-MCS1-EF1-copGFP만병독질립재체상,매절화측서증실정학구건중조질립,건립WT1이구체표체비례개변적단극륭세포주.MTT법검측세포증식활성,형태학관찰급Annexin Ⅴ검측세포조망.결과:성공구건료진핵표체재체PCDH1-MCS1-EF1-copGFP-WT1(17AA-/KTS-),전염HL-60세포후,실시형광정량RT-PCR화Western blotting현시중조질립전염세포중WT1(17AA-/KTS-)mRNA화단백수평명현고우공질립전염조화정상대조조.중조질립전염세포적생장억제솔고우공질립전염조화정상대조조,차이현저(P＜0.05).가2 μmol/L삼양화이신(As2O3)배양48h후,형태학관찰발현3조세포도출현료조망형태,단중조질립전염세포경위명현.류식세포술결과현시,As2O3작용24h후,중조질립전염세포조망솔교공질립전염조화정상대조조세포승고,차이현저(P＜0.05).결론:증가외원성WT1(17AA-/KTS-)이구체적표체능억제HL-60세포증식,촉진As2O3유도적세포조망.
