中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2013年
5期
883-888
,共6页
付晓霞%叶萍%李雪%钟玙沄%崔航%陈小欢%蔡军伟%姜勇%刘靖华
付曉霞%葉萍%李雪%鐘玙沄%崔航%陳小歡%蔡軍偉%薑勇%劉靖華
부효하%협평%리설%종여운%최항%진소환%채군위%강용%류정화
原核蛋白表达%组蛋白类%巨噬细胞
原覈蛋白錶達%組蛋白類%巨噬細胞
원핵단백표체%조단백류%거서세포
目的:用不同方法制备组蛋白并观察组蛋白在体外对巨噬细胞活力及细胞因子释放的影响.方法:用基因克隆的方法构建组蛋白H3和H4的原核表达质粒,分别表达和纯化带谷胱甘肽S-转移酶(GST)和组氨酸(His)标签的组蛋白(GST-H3、GST-H4、His-H3和His-H4)；用高盐法提取真核细胞(RAW264.7和293F细胞)组蛋白；用上述不同来源组蛋白(7.5 ～50 mg/L)刺激巨噬细胞4h,利用MTT和流式细胞术检测巨噬细胞活力；用液相芯片方法检测不同来源组蛋白对巨噬细胞释放在培养上清中的细胞因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度.结果:His-H3/H4和真核细胞来源的组蛋白明显降低细胞活性,诱导RAW264.7细胞发生晚期凋亡和坏死；不同来源组蛋白对RAW264.7细胞释放IL-6和TNF-α均有不同程度的促进作用.结论:原核表达His-H3、His-H4及真核细胞提取的组蛋白均可抑制巨噬细胞活力,诱导巨噬细胞发生晚期凋亡和坏死.组蛋白可能通过促进炎症细胞因子的释放参与了炎症反应过程.
目的:用不同方法製備組蛋白併觀察組蛋白在體外對巨噬細胞活力及細胞因子釋放的影響.方法:用基因剋隆的方法構建組蛋白H3和H4的原覈錶達質粒,分彆錶達和純化帶穀胱甘肽S-轉移酶(GST)和組氨痠(His)標籤的組蛋白(GST-H3、GST-H4、His-H3和His-H4)；用高鹽法提取真覈細胞(RAW264.7和293F細胞)組蛋白；用上述不同來源組蛋白(7.5 ～50 mg/L)刺激巨噬細胞4h,利用MTT和流式細胞術檢測巨噬細胞活力；用液相芯片方法檢測不同來源組蛋白對巨噬細胞釋放在培養上清中的細胞因子白細胞介素6(IL-6)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)的濃度.結果:His-H3/H4和真覈細胞來源的組蛋白明顯降低細胞活性,誘導RAW264.7細胞髮生晚期凋亡和壞死；不同來源組蛋白對RAW264.7細胞釋放IL-6和TNF-α均有不同程度的促進作用.結論:原覈錶達His-H3、His-H4及真覈細胞提取的組蛋白均可抑製巨噬細胞活力,誘導巨噬細胞髮生晚期凋亡和壞死.組蛋白可能通過促進炎癥細胞因子的釋放參與瞭炎癥反應過程.
목적:용불동방법제비조단백병관찰조단백재체외대거서세포활력급세포인자석방적영향.방법:용기인극륭적방법구건조단백H3화H4적원핵표체질립,분별표체화순화대곡광감태S-전이매(GST)화조안산(His)표첨적조단백(GST-H3、GST-H4、His-H3화His-H4)；용고염법제취진핵세포(RAW264.7화293F세포)조단백；용상술불동래원조단백(7.5 ～50 mg/L)자격거서세포4h,이용MTT화류식세포술검측거서세포활력；용액상심편방법검측불동래원조단백대거서세포석방재배양상청중적세포인자백세포개소6(IL-6)화종류배사인자α(TNF-α)적농도.결과:His-H3/H4화진핵세포래원적조단백명현강저세포활성,유도RAW264.7세포발생만기조망화배사；불동래원조단백대RAW264.7세포석방IL-6화TNF-α균유불동정도적촉진작용.결론:원핵표체His-H3、His-H4급진핵세포제취적조단백균가억제거서세포활력,유도거서세포발생만기조망화배사.조단백가능통과촉진염증세포인자적석방삼여료염증반응과정.
