CAJ | 학술논문

目的:通过腺病毒介导的RNA干扰技术沉默一种新的脂联素(APN)受体T-cadherin的表达,并建立心肌细胞缺氧/复氧(H/R)模型,观察T-cadherin对H/R所致心肌细胞凋亡的影响.方法:选用原代培养72 h的心肌细胞进行实验,随机分为5组:(1)空白对照组:心肌细胞正常培养；(2)H/R组；(3) APN +H/R组；(4)Ad-T-cadherin-siRNA+ APN+ H/R组；(5) Ad-HK(腺病毒阴性对照)+APN+ H/R组.首先,确定最适合的腺病毒感染滴度,RT-PCR和Western blotting检测腺病毒介导的干扰RNA对T-cadherin表达的影响效果；其次,通过流式细胞术和TUNEL检测心肌细胞的凋亡.结果:原代培养获得高纯度的乳鼠心肌细胞.腺病毒感染的最佳MOI值为100,48h后腺病毒的感染效率和红色荧光蛋白表达最强,其效率高于90％.RT-PCR和Western blotting证实腺病毒介导的siRNA转染的心肌细胞T-cadherin mRNA和蛋白水平均明显下降(P＜0.05).Ad-T-cadherin-siRNA+APN +H/R组心肌细胞凋亡率与APN+ H/R组相比显著升高(P＜0.05),与H/R组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:重组腺病毒Ad-T-cadherin-siRNA能够在体外高效感染原代心肌细胞,并成功降低T-cadherin在心肌细胞的表达；低表达的T-cadherin阻断了脂联素对缺氧/复氧诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用.
목적:통과선병독개도적RNA간우기술침묵일충신적지련소(APN)수체T-cadherin적표체,병건립심기세포결양/복양(H/R)모형,관찰T-cadherin대H/R소치심기세포조망적영향.방법:선용원대배양72 h적심기세포진행실험,수궤분위5조:(1)공백대조조:심기세포정상배양；(2)H/R조；(3) APN +H/R조；(4)Ad-T-cadherin-siRNA+ APN+ H/R조；(5) Ad-HK(선병독음성대조)+APN+ H/R조.수선,학정최괄합적선병독감염적도,RT-PCR화Western blotting검측선병독개도적간우RNA대T-cadherin표체적영향효과；기차,통과류식세포술화TUNEL검측심기세포적조망.결과:원대배양획득고순도적유서심기세포.선병독감염적최가MOI치위100,48h후선병독적감염효솔화홍색형광단백표체최강,기효솔고우90％.RT-PCR화Western blotting증실선병독개도적siRNA전염적심기세포T-cadherin mRNA화단백수평균명현하강(P＜0.05).Ad-T-cadherin-siRNA+APN +H/R조심기세포조망솔여APN+ H/R조상비현저승고(P＜0.05),여H/R조상비차이무통계학의의(P＞0.05).결론:중조선병독Ad-T-cadherin-siRNA능구재체외고효감염원대심기세포,병성공강저T-cadherin재심기세포적표체；저표체적T-cadherin조단료지련소대결양/복양유도적유서심기세포조망적억제작용.