CAJ | 학술논문

目的构建大容量且能高效展示于哺乳动物细胞表面的全长人源膀胱癌特异性抗体基因库.方法分离膀胱癌患者的外周血单核细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,用RT-PCR方法扩增全套IgG1重链可变区(VH)和Kappa型轻链全长(LCκ)基因,经过相应的限制性内切酶酶切后分别插入pDGB-HC-TM载体,分别构建膀胱癌特异性的抗体重链基因库和轻链基因库(一级抗体库).随机挑取20个单克隆测定抗体基因序列,并瞬时转染FCHO细胞,结合流式细胞仪检测细胞表面抗体的表达.将上述构建好的轻重链基因库通过4片段连接方法插入双表达载体pDGB4,构建二级抗体库,转染FCHO后用流式细胞仪检测细胞表面抗体表达.结果分别成功构建了膀胱癌特异性的重链基因库和轻链基因库,随机挑取的轻重链单克隆各有7个和9个含有正确的抗体基因编码序列,且能展示于哺乳动物细胞表面,理论库容量达到3.32×1011[(1.7× 106×70％)×(3.1×105×90％)].成功构建了膀胱癌二级抗体库,库容量为9×105.结论利用哺乳动物细胞表面展示技术,我们成功构建了膀胱癌特异性的全长人源抗体基因库,一级抗体库的库容量达到3.32× 1011,二级抗体库库容量达到9x105,为下一步筛选特异性、高亲和力抗膀胱癌抗体奠定了基础.
목적 구건대용량차능고효전시우포유동물세포표면적전장인원방광암특이성항체기인고.방법 분리방광암환자적외주혈단핵세포(PBMC),제취PBMC적총RNA,용RT-PCR방법확증전투IgG1중련가변구(VH)화Kappa형경련전장(LCκ)기인,경과상응적한제성내절매매절후분별삽입pDGB-HC-TM재체,분별구건방광암특이성적항체중련기인고화경련기인고(일급항체고).수궤도취20개단극륭측정항체기인서렬,병순시전염FCHO세포,결합류식세포의검측세포표면항체적표체.장상술구건호적경중련기인고통과4편단련접방법삽입쌍표체재체pDGB4,구건이급항체고,전염FCHO후용류식세포의검측세포표면항체표체.결과 분별성공구건료방광암특이성적중련기인고화경련기인고,수궤도취적경중련단극륭각유7개화9개함유정학적항체기인편마서렬,차능전시우포유동물세포표면,이론고용량체도3.32×1011[(1.7× 106×70％)×(3.1×105×90％)].성공구건료방광암이급항체고,고용량위9×105.결론 이용포유동물세포표면전시기술,아문성공구건료방광암특이성적전장인원항체기인고,일급항체고적고용량체도3.32× 1011,이급항체고고용량체도9x105,위하일보사선특이성、고친화력항방광암항체전정료기출.