南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2013年
5期
654-660
,共7页
陈芳%周畅%陆艳霞%袁理%彭璠莉%郑林%李学农
陳芳%週暢%陸豔霞%袁理%彭璠莉%鄭林%李學農
진방%주창%륙염하%원리%팽번리%정림%리학농
结肠癌细胞%hsa-miR-186%慢病毒%增殖%迁移%侵袭
結腸癌細胞%hsa-miR-186%慢病毒%增殖%遷移%侵襲
결장암세포%hsa-miR-186%만병독%증식%천이%침습
目的 检测hsa-miR-186在结肠癌组织及细胞中的表达,探讨hsa-mir-186对结肠癌细胞生物学特性的影响及作用.方法 应用实时荧光定量PCR检测了miR-186在12对配对的结肠癌组织、癌旁组织和5株结肠癌细胞中的表达情况；扩增包含miR-186前体序列在内的基因片段,并将其克隆至PLVTHM载体,将PLVTHM-miR186质粒转染SW620细胞,流式分选慢病毒感染的SW620细胞；CCK-8法、划痕实验和Transwell检测细胞检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力.Western Blot检测靶基因YY1蛋白水平的表达.结果 与癌组织相比,12例癌组织中miR-186的平均表达量为0.0024±0.0027,显著低于癌旁组织的0.066±0.068,P=0.008;miR-186在高转移潜能的人结肠癌细胞SW620和LOVO相对表达量分别为0.118±0.138和0.157±0.001,与在低转移潜能HT-29细胞中表达量1.000±0.00,差异具有统计学意义P＜0.05;质粒双酶切及测序鉴定PLVTHM-hsa-miR186重组质粒构建成功；荧光定量PCR表明稳定过表达miR-186的结肠癌细胞株SW620构建成功,且过表达miR-186后降低了细胞的增殖、迁移及侵袭能力,差异均具有统计学意义P＜0.05.稳定过表达miR-186的细胞中,miR-186的表达明显高于对照组和未处理组,YY1蛋白质水平有所下降.结论 hsa-miR-186在结肠癌组织以及在高转移潜能的人结肠癌细胞SW620、LOVO中低表达,具有类似抑癌基因的作用；成功构建PLVTHM-miR186慢病毒重组质粒,并稳定转染结肠癌细胞SW620,抑制了细胞的增殖、迁移和侵袭能力.miR-186调控YY1表达可能是抑制结直肠癌生物特性的重要机制之一.
目的 檢測hsa-miR-186在結腸癌組織及細胞中的錶達,探討hsa-mir-186對結腸癌細胞生物學特性的影響及作用.方法 應用實時熒光定量PCR檢測瞭miR-186在12對配對的結腸癌組織、癌徬組織和5株結腸癌細胞中的錶達情況；擴增包含miR-186前體序列在內的基因片段,併將其剋隆至PLVTHM載體,將PLVTHM-miR186質粒轉染SW620細胞,流式分選慢病毒感染的SW620細胞；CCK-8法、劃痕實驗和Transwell檢測細胞檢測細胞的增殖、遷移和侵襲能力.Western Blot檢測靶基因YY1蛋白水平的錶達.結果 與癌組織相比,12例癌組織中miR-186的平均錶達量為0.0024±0.0027,顯著低于癌徬組織的0.066±0.068,P=0.008;miR-186在高轉移潛能的人結腸癌細胞SW620和LOVO相對錶達量分彆為0.118±0.138和0.157±0.001,與在低轉移潛能HT-29細胞中錶達量1.000±0.00,差異具有統計學意義P＜0.05;質粒雙酶切及測序鑒定PLVTHM-hsa-miR186重組質粒構建成功；熒光定量PCR錶明穩定過錶達miR-186的結腸癌細胞株SW620構建成功,且過錶達miR-186後降低瞭細胞的增殖、遷移及侵襲能力,差異均具有統計學意義P＜0.05.穩定過錶達miR-186的細胞中,miR-186的錶達明顯高于對照組和未處理組,YY1蛋白質水平有所下降.結論 hsa-miR-186在結腸癌組織以及在高轉移潛能的人結腸癌細胞SW620、LOVO中低錶達,具有類似抑癌基因的作用；成功構建PLVTHM-miR186慢病毒重組質粒,併穩定轉染結腸癌細胞SW620,抑製瞭細胞的增殖、遷移和侵襲能力.miR-186調控YY1錶達可能是抑製結直腸癌生物特性的重要機製之一.
목적 검측hsa-miR-186재결장암조직급세포중적표체,탐토hsa-mir-186대결장암세포생물학특성적영향급작용.방법 응용실시형광정량PCR검측료miR-186재12대배대적결장암조직、암방조직화5주결장암세포중적표체정황；확증포함miR-186전체서렬재내적기인편단,병장기극륭지PLVTHM재체,장PLVTHM-miR186질립전염SW620세포,류식분선만병독감염적SW620세포；CCK-8법、화흔실험화Transwell검측세포검측세포적증식、천이화침습능력.Western Blot검측파기인YY1단백수평적표체.결과 여암조직상비,12례암조직중miR-186적평균표체량위0.0024±0.0027,현저저우암방조직적0.066±0.068,P=0.008;miR-186재고전이잠능적인결장암세포SW620화LOVO상대표체량분별위0.118±0.138화0.157±0.001,여재저전이잠능HT-29세포중표체량1.000±0.00,차이구유통계학의의P＜0.05;질립쌍매절급측서감정PLVTHM-hsa-miR186중조질립구건성공；형광정량PCR표명은정과표체miR-186적결장암세포주SW620구건성공,차과표체miR-186후강저료세포적증식、천이급침습능력,차이균구유통계학의의P＜0.05.은정과표체miR-186적세포중,miR-186적표체명현고우대조조화미처리조,YY1단백질수평유소하강.결론 hsa-miR-186재결장암조직이급재고전이잠능적인결장암세포SW620、LOVO중저표체,구유유사억암기인적작용；성공구건PLVTHM-miR186만병독중조질립,병은정전염결장암세포SW620,억제료세포적증식、천이화침습능력.miR-186조공YY1표체가능시억제결직장암생물특성적중요궤제지일.
