中国农业科技导报
中國農業科技導報
중국농업과기도보
REVIEW OF CHINA AGRICULTURAL SCIENCE AND TECHNOLOGY
2013年
3期
175-182
,共8页
张显昱%李强%李明%黄华%叶仕根%李华
張顯昱%李彊%李明%黃華%葉仕根%李華
장현욱%리강%리명%황화%협사근%리화
鮰爱德华菌%检测%间接ELISA%竞争ELISA
鮰愛德華菌%檢測%間接ELISA%競爭ELISA
회애덕화균%검측%간접ELISA%경쟁ELISA
Edwardsiella ictaluri%detection%indirect ELISA%competitive ELISA
为了对水产动物致病菌鮰爱德华菌进行早期、快速地检测,以鮰爱德华菌单克隆抗体5D11作为检测抗体,分别建立了间接 ELISA 和竞争 ELISA 两种快速检测鮰爱德华菌的方法,并用棋盘滴定法进行了条件的优化。结果显示,间接 ELISA 实验中采用37℃过夜这种包被方法能有效促进酶标板对细菌的吸附作用,单克隆抗体和二抗的最佳稀释倍数分别为1∶80和1∶1000,病原菌的检测灵敏度为5×106 cells/ mL,交叉反应实验证明该方法特异性强,并且可用于对鮰爱德华菌标准菌株及其分离株的快速检测；同时采用棋盘滴定法确定了竞争 ELISA 实验中包被抗原-抗体最佳工作组合为5×108~1∶80、抗体和竞争抗原比例为3∶7,并制作出了相关系数为0.9901的标准曲线,该方法特异性强,最低检出限106 cells/ mL,可在一定范围内对鮰爱德华菌进行定性和定量检测,弥补了间接 ELISA 的不足。
為瞭對水產動物緻病菌鮰愛德華菌進行早期、快速地檢測,以鮰愛德華菌單剋隆抗體5D11作為檢測抗體,分彆建立瞭間接 ELISA 和競爭 ELISA 兩種快速檢測鮰愛德華菌的方法,併用棋盤滴定法進行瞭條件的優化。結果顯示,間接 ELISA 實驗中採用37℃過夜這種包被方法能有效促進酶標闆對細菌的吸附作用,單剋隆抗體和二抗的最佳稀釋倍數分彆為1∶80和1∶1000,病原菌的檢測靈敏度為5×106 cells/ mL,交扠反應實驗證明該方法特異性彊,併且可用于對鮰愛德華菌標準菌株及其分離株的快速檢測；同時採用棋盤滴定法確定瞭競爭 ELISA 實驗中包被抗原-抗體最佳工作組閤為5×108~1∶80、抗體和競爭抗原比例為3∶7,併製作齣瞭相關繫數為0.9901的標準麯線,該方法特異性彊,最低檢齣限106 cells/ mL,可在一定範圍內對鮰愛德華菌進行定性和定量檢測,瀰補瞭間接 ELISA 的不足。
위료대수산동물치병균회애덕화균진행조기、쾌속지검측,이회애덕화균단극륭항체5D11작위검측항체,분별건립료간접 ELISA 화경쟁 ELISA 량충쾌속검측회애덕화균적방법,병용기반적정법진행료조건적우화。결과현시,간접 ELISA 실험중채용37℃과야저충포피방법능유효촉진매표판대세균적흡부작용,단극륭항체화이항적최가희석배수분별위1∶80화1∶1000,병원균적검측령민도위5×106 cells/ mL,교차반응실험증명해방법특이성강,병차가용우대회애덕화균표준균주급기분리주적쾌속검측；동시채용기반적정법학정료경쟁 ELISA 실험중포피항원-항체최가공작조합위5×108~1∶80、항체화경쟁항원비례위3∶7,병제작출료상관계수위0.9901적표준곡선,해방법특이성강,최저검출한106 cells/ mL,가재일정범위내대회애덕화균진행정성화정량검측,미보료간접 ELISA 적불족。
10.3969/j.issn.1008-0864.2013.03.25
