中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2013年
4期
294-298
,共5页
彭珊%闫丽萍%李国新%李雪松%滕巧泱%肖亚莉%何文兴%李泽君
彭珊%閆麗萍%李國新%李雪鬆%滕巧泱%肖亞莉%何文興%李澤君
팽산%염려평%리국신%리설송%등교앙%초아리%하문흥%리택군
鸭坦布苏病毒%荧光定量PCR%TaqMan荧光探针
鴨坦佈囌病毒%熒光定量PCR%TaqMan熒光探針
압탄포소병독%형광정량PCR%TaqMan형광탐침
为提高鸭坦布苏病毒(DTMUV) TaqMan荧光定量PCR方法的敏感性和简化反应条件,本研究在前期建立的TaqMan荧光定量PCR方法的基础上,设计一条特异性的反转录引物,优化反应体系,建立了简便、快速、敏感的TaqMan荧光定量PCR方法.该荧光定量PCR方法最低检测限为10拷贝,敏感性是未优化的荧光定量PCR方法的5倍、是普通PCR方法的100倍,并且该方法对DTMUV的最低检测限是0.01半数鸡胚致死量(ELD50).通过批内和批间实验的变异系数表明优化的荧光定量PCR方法的重复性比未优化的荧光定量PCR方法好.通过该优化的荧光定量PCR方法检测其它常见的鸭病病毒的DNAs或RNAs,证明了该方法特异性好.对现地60份疑似DTMUV的样品进行检测,用该方法检出57份样品为阳性,明显高于普通PCR,并且在区分35Ct值左右样品试验中敏感性优于未优化的荧光定量PCR方法.该优化的DTMUV TaqMan荧光定量PCR方法更适用于DTMUV的快速定量流行病学诊断.
為提高鴨坦佈囌病毒(DTMUV) TaqMan熒光定量PCR方法的敏感性和簡化反應條件,本研究在前期建立的TaqMan熒光定量PCR方法的基礎上,設計一條特異性的反轉錄引物,優化反應體繫,建立瞭簡便、快速、敏感的TaqMan熒光定量PCR方法.該熒光定量PCR方法最低檢測限為10拷貝,敏感性是未優化的熒光定量PCR方法的5倍、是普通PCR方法的100倍,併且該方法對DTMUV的最低檢測限是0.01半數鷄胚緻死量(ELD50).通過批內和批間實驗的變異繫數錶明優化的熒光定量PCR方法的重複性比未優化的熒光定量PCR方法好.通過該優化的熒光定量PCR方法檢測其它常見的鴨病病毒的DNAs或RNAs,證明瞭該方法特異性好.對現地60份疑似DTMUV的樣品進行檢測,用該方法檢齣57份樣品為暘性,明顯高于普通PCR,併且在區分35Ct值左右樣品試驗中敏感性優于未優化的熒光定量PCR方法.該優化的DTMUV TaqMan熒光定量PCR方法更適用于DTMUV的快速定量流行病學診斷.
위제고압탄포소병독(DTMUV) TaqMan형광정량PCR방법적민감성화간화반응조건,본연구재전기건립적TaqMan형광정량PCR방법적기출상,설계일조특이성적반전록인물,우화반응체계,건립료간편、쾌속、민감적TaqMan형광정량PCR방법.해형광정량PCR방법최저검측한위10고패,민감성시미우화적형광정량PCR방법적5배、시보통PCR방법적100배,병차해방법대DTMUV적최저검측한시0.01반수계배치사량(ELD50).통과비내화비간실험적변이계수표명우화적형광정량PCR방법적중복성비미우화적형광정량PCR방법호.통과해우화적형광정량PCR방법검측기타상견적압병병독적DNAs혹RNAs,증명료해방법특이성호.대현지60빈의사DTMUV적양품진행검측,용해방법검출57빈양품위양성,명현고우보통PCR,병차재구분35Ct치좌우양품시험중민감성우우미우화적형광정량PCR방법.해우화적DTMUV TaqMan형광정량PCR방법경괄용우DTMUV적쾌속정량류행병학진단.
