CAJ | 학술논문

目的：建立小鼠腔前卵泡体外海藻酸盐包埋培养的三维培养(3-dimensions in vitro growth，3D-IVG)方法以及成熟卵母细胞体外受精体系。方法：采用机械法分离12日龄雌性昆明小鼠卵巢，获取结构完整的腔前卵泡，腔前卵泡经过包埋后体外立体化培养，激素超排，收集黏液化的卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte-complex，COCs)，分别计数发泡期(germinal vesicle， GV)卵母细胞、生发泡破裂期(germinal vesicle breakdown ，GVBD)卵母细胞和含有第一极体(first polar body，PB)卵母细胞，制备卵母细胞染色体并进行C带染色分析。同时设小鼠体内超排卵母细胞(in vivo convention，IVC)作为对照。再将体外培养成熟的卵母细胞与获能后的小鼠精子受精，观察受精情况。结果：经过3D-IVG，卵泡存活率为82.5%，卵泡发育过程维持完整的三维结构，卵泡直径增长迅速，培养6 d后，有91.7%成腔；在激素超排后，有82.6%COCs黏液化。GV、GVBD和含有PB的成熟卵母细胞分别为6.1%，45.4%和48.5%。3D-IVG获得的成熟卵母细胞百分率(48.5%)明显低于体内超排成熟卵母细胞百分率(82.9%)，差异有统计学意义(P<0.05)。但3D-IVG所获得的卵母细胞染色体C带分析表明染色体数目为20条，结构未见异常，与体内超排卵母细胞一致。并观察到3D-IVG培养成熟的卵母细胞可以受精成功。结论：建立并完善了小鼠腔前卵泡的三维体外培养体系，为生殖毒性实验研究和胚胎工程研究提供了新的方法。
목적：건립소서강전란포체외해조산염포매배양적삼유배양(3-dimensions in vitro growth，3D-IVG)방법이급성숙란모세포체외수정체계。방법：채용궤계법분리12일령자성곤명소서란소，획취결구완정적강전란포，강전란포경과포매후체외입체화배양，격소초배，수집점액화적란구-란모세포복합체(cumulus-oocyte-complex，COCs)，분별계수발포기(germinal vesicle， GV)란모세포、생발포파렬기(germinal vesicle breakdown ，GVBD)란모세포화함유제일겁체(first polar body，PB)란모세포，제비란모세포염색체병진행C대염색분석。동시설소서체내초배란모세포(in vivo convention，IVC)작위대조。재장체외배양성숙적란모세포여획능후적소서정자수정，관찰수정정황。결과：경과3D-IVG，란포존활솔위82.5%，란포발육과정유지완정적삼유결구，란포직경증장신속，배양6 d후，유91.7%성강；재격소초배후，유82.6%COCs점액화。GV、GVBD화함유PB적성숙란모세포분별위6.1%，45.4%화48.5%。3D-IVG획득적성숙란모세포백분솔(48.5%)명현저우체내초배성숙란모세포백분솔(82.9%)，차이유통계학의의(P<0.05)。단3D-IVG소획득적란모세포염색체C대분석표명염색체수목위20조，결구미견이상，여체내초배란모세포일치。병관찰도3D-IVG배양성숙적란모세포가이수정성공。결론：건립병완선료소서강전란포적삼유체외배양체계，위생식독성실험연구화배태공정연구제공료신적방법。
10.3969/j.issn.1004-616x.2013.03.011