CAJ | 학술논문

[目的]建立和优化割手密AFLP分子标记技术体系,为割手密遗传多样性分析、遗传图谱构建提供技术支持.[方法]以广西割手密GXS87-16、GXS85-30、GXS79-9、GXS96、GXS112、GXS212为材料,利用改良SDS法提取DNA,并用EcoR Ⅰ和Mse Ⅰ酶切,连接接头后,采用正交试验设计对影响预扩增反应和选择性扩增反应的主要成分如MG2+、模板DNA、引物、dNTP、Taq聚合酶浓度进行优化.[结果]样品DNA用限制性内切酶EcoR Ⅰ和Mse Ⅰ各3U于PCR仪过夜可完全酶切.经正交设计优化,较佳的预扩增体系包含0.4 μL dNTPs(20 mmol/mL),1.6 μL Mg2+(25mmol/mL),2.0 μL EcoR Ⅰ-P(5 pmol/mL),2.0μL Mse Ⅰ-P(5 pmol/mL),1 UTaq酶(1 U/μL),DNA模板稀释10倍；选择性扩增体系包含0.4 μL dNTPs(20 mmol/mL),0.8 μL Mg2+(25 mmol/mL),1.0 μL EcoR Ⅰ-AAG(6 pmol/mL),1.0μL Mse Ⅰ-CAG(6 pmol/mL),3U Taq酶(1 U/μL),DNA模板稀释20倍.以对优化反应体系扩增获得的PCR产物用5％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染后,可获得清晰的多态性指纹图谱.[结论]建立的割手密AFLP分子标记技术体系具有扩增条带清晰、多态性丰富的特点,可为构建割手密高密度遗传图谱提供技术支持.
[목적]건립화우화할수밀AFLP분자표기기술체계,위할수밀유전다양성분석、유전도보구건제공기술지지.[방법]이엄서할수밀GXS87-16、GXS85-30、GXS79-9、GXS96、GXS112、GXS212위재료,이용개량SDS법제취DNA,병용EcoR Ⅰ화Mse Ⅰ매절,련접접두후,채용정교시험설계대영향예확증반응화선택성확증반응적주요성분여MG2+、모판DNA、인물、dNTP、Taq취합매농도진행우화.[결과]양품DNA용한제성내절매EcoR Ⅰ화Mse Ⅰ각3U우PCR의과야가완전매절.경정교설계우화,교가적예확증체계포함0.4 μL dNTPs(20 mmol/mL),1.6 μL Mg2+(25mmol/mL),2.0 μL EcoR Ⅰ-P(5 pmol/mL),2.0μL Mse Ⅰ-P(5 pmol/mL),1 UTaq매(1 U/μL),DNA모판희석10배；선택성확증체계포함0.4 μL dNTPs(20 mmol/mL),0.8 μL Mg2+(25 mmol/mL),1.0 μL EcoR Ⅰ-AAG(6 pmol/mL),1.0μL Mse Ⅰ-CAG(6 pmol/mL),3U Taq매(1 U/μL),DNA모판희석20배.이대우화반응체계확증획득적PCR산물용5％변성취병희선알응효전영화은염후,가획득청석적다태성지문도보.[결론]건립적할수밀AFLP분자표기기술체계구유확증조대청석、다태성봉부적특점,가위구건할수밀고밀도유전도보제공기술지지.