南方农业学报
南方農業學報
남방농업학보
GUANGXI AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
4期
545-551
,共7页
黄东亮%秦翠鲜%陈忠良%桂意云%李双喜%汪淼%廖青%李杨瑞
黃東亮%秦翠鮮%陳忠良%桂意雲%李雙喜%汪淼%廖青%李楊瑞
황동량%진취선%진충량%계의운%리쌍희%왕묘%료청%리양서
甘蔗%蔗糖磷酸合成酶%SofSPSB%克隆%原核表达
甘蔗%蔗糖燐痠閤成酶%SofSPSB%剋隆%原覈錶達
감자%자당린산합성매%SofSPSB%극륭%원핵표체
[目的]克隆甘蔗B家族SofSPSB基因并进行原核表达,为进一步研究甘蔗SPS酶学特性及SPS活性调控机制奠定基础.[方法]在进化分析的基础上,通过同源克隆获得甘蔗SofSPSB基因部分序列,再结合RACE技术获得全长cDNA序列.扩增SofSPSB基因ORF并连到原核表达载体pETBlue-2上,导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达.[结果]通过比对B家族中进化关系很近的玉米(Zea mays)ZmSPS1和水稻(Oryza sativa) OsSPS1基因序列,并在保守区设计一对引物扩增获得甘蔗B家族SPS基因(SofSPSB) 2330 bp序列.结合5'-RACE和3'-RACE技术获得3481 bp SofSPSB基因全长cDNA序列,该序列包含一个3225 bp的开放阅读框(ORF)；起始密码子(ATG)位于转录起始位点后56 bp处,终止密码子(TGA)后有一段201 bp的非编码序列,并带有真核生物典型的polyA尾巴；编码1074个氨基酸,SofSPSB与Zm-SPS1、OsSPS1的核苷酸序列同源性分别为94.7％和81.3％,氨基酸序列同源性分别为96.0％和83.9％；其理论分子量Mw=118.96 kDa,等电点pI=6.30.经原核表达后纯化获得带6×His标签的融合蛋白.[结论]克隆获得甘蔗B家族Sof-SPSB基因全长cDNA序列,成功构建了SofSPSB基因原核表达载体,使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.
[目的]剋隆甘蔗B傢族SofSPSB基因併進行原覈錶達,為進一步研究甘蔗SPS酶學特性及SPS活性調控機製奠定基礎.[方法]在進化分析的基礎上,通過同源剋隆穫得甘蔗SofSPSB基因部分序列,再結閤RACE技術穫得全長cDNA序列.擴增SofSPSB基因ORF併連到原覈錶達載體pETBlue-2上,導入大腸桿菌BL21(DE3)中錶達.[結果]通過比對B傢族中進化關繫很近的玉米(Zea mays)ZmSPS1和水稻(Oryza sativa) OsSPS1基因序列,併在保守區設計一對引物擴增穫得甘蔗B傢族SPS基因(SofSPSB) 2330 bp序列.結閤5'-RACE和3'-RACE技術穫得3481 bp SofSPSB基因全長cDNA序列,該序列包含一箇3225 bp的開放閱讀框(ORF)；起始密碼子(ATG)位于轉錄起始位點後56 bp處,終止密碼子(TGA)後有一段201 bp的非編碼序列,併帶有真覈生物典型的polyA尾巴；編碼1074箇氨基痠,SofSPSB與Zm-SPS1、OsSPS1的覈苷痠序列同源性分彆為94.7％和81.3％,氨基痠序列同源性分彆為96.0％和83.9％；其理論分子量Mw=118.96 kDa,等電點pI=6.30.經原覈錶達後純化穫得帶6×His標籤的融閤蛋白.[結論]剋隆穫得甘蔗B傢族Sof-SPSB基因全長cDNA序列,成功構建瞭SofSPSB基因原覈錶達載體,使其在大腸桿菌BL21(DE3)中錶達.
[목적]극륭감자B가족SofSPSB기인병진행원핵표체,위진일보연구감자SPS매학특성급SPS활성조공궤제전정기출.[방법]재진화분석적기출상,통과동원극륭획득감자SofSPSB기인부분서렬,재결합RACE기술획득전장cDNA서렬.확증SofSPSB기인ORF병련도원핵표체재체pETBlue-2상,도입대장간균BL21(DE3)중표체.[결과]통과비대B가족중진화관계흔근적옥미(Zea mays)ZmSPS1화수도(Oryza sativa) OsSPS1기인서렬,병재보수구설계일대인물확증획득감자B가족SPS기인(SofSPSB) 2330 bp서렬.결합5'-RACE화3'-RACE기술획득3481 bp SofSPSB기인전장cDNA서렬,해서렬포함일개3225 bp적개방열독광(ORF)；기시밀마자(ATG)위우전록기시위점후56 bp처,종지밀마자(TGA)후유일단201 bp적비편마서렬,병대유진핵생물전형적polyA미파；편마1074개안기산,SofSPSB여Zm-SPS1、OsSPS1적핵감산서렬동원성분별위94.7％화81.3％,안기산서렬동원성분별위96.0％화83.9％；기이론분자량Mw=118.96 kDa,등전점pI=6.30.경원핵표체후순화획득대6×His표첨적융합단백.[결론]극륭획득감자B가족Sof-SPSB기인전장cDNA서렬,성공구건료SofSPSB기인원핵표체재체,사기재대장간균BL21(DE3)중표체.
