安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2013年
6期
607-611
,共5页
毛雨红%莫碧文%李劳冬%李洁%王孝养%韦江红%黄剑伟%徐青
毛雨紅%莫碧文%李勞鼕%李潔%王孝養%韋江紅%黃劍偉%徐青
모우홍%막벽문%리로동%리길%왕효양%위강홍%황검위%서청
骨髓间充质干细胞%原代培养%CM-DiI%细胞标记
骨髓間充質榦細胞%原代培養%CM-DiI%細胞標記
골수간충질간세포%원대배양%CM-DiI%세포표기
目的 建立骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外分离纯化、扩增以及标记的方法,为后期体内实验提供依据.方法 采用全骨髓培养和差速贴壁法分离纯化MSCs,培养期间观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞周期和表面标记物,成脂成骨分化诱导鉴定.MSCs经氯甲基苯甲酰氨荧光染料(CM-DiI)标记后,荧光显微镜观察荧光标记情况,流式细胞仪检测标记率,并通过绘制生长曲线明确CM-DiI对MSCs生长增殖的影响.结果 MSCs接种24~48 h后,贴壁细胞多为圆形、多角形、梭形,传至第3代时形态呈均一的长梭形.第3代MSCs高表达CD44,低表达CD106,不表达CD11b、CD45,85%以上细胞处于G0/G1期;成脂成骨诱导分别经油红O和茜素红染色均呈阳性.CM-DiI标记后荧光显微镜下细胞呈红色荧光,体外培养2周荧光未见明显减弱;流式细胞术检测显示标记率达95%以上,标记后细胞生长增殖不受影响.结论 通过全骨髓贴壁法及其扩增后可获得大量纯度较高的间充质干细胞,CM-DiI标记是一种简单、稳定、无毒的细胞标记方法.
目的 建立骨髓間充質榦細胞(MSCs)的體外分離純化、擴增以及標記的方法,為後期體內實驗提供依據.方法 採用全骨髓培養和差速貼壁法分離純化MSCs,培養期間觀察細胞形態,流式細胞儀檢測細胞週期和錶麵標記物,成脂成骨分化誘導鑒定.MSCs經氯甲基苯甲酰氨熒光染料(CM-DiI)標記後,熒光顯微鏡觀察熒光標記情況,流式細胞儀檢測標記率,併通過繪製生長麯線明確CM-DiI對MSCs生長增殖的影響.結果 MSCs接種24~48 h後,貼壁細胞多為圓形、多角形、梭形,傳至第3代時形態呈均一的長梭形.第3代MSCs高錶達CD44,低錶達CD106,不錶達CD11b、CD45,85%以上細胞處于G0/G1期;成脂成骨誘導分彆經油紅O和茜素紅染色均呈暘性.CM-DiI標記後熒光顯微鏡下細胞呈紅色熒光,體外培養2週熒光未見明顯減弱;流式細胞術檢測顯示標記率達95%以上,標記後細胞生長增殖不受影響.結論 通過全骨髓貼壁法及其擴增後可穫得大量純度較高的間充質榦細胞,CM-DiI標記是一種簡單、穩定、無毒的細胞標記方法.
목적 건립골수간충질간세포(MSCs)적체외분리순화、확증이급표기적방법,위후기체내실험제공의거.방법 채용전골수배양화차속첩벽법분리순화MSCs,배양기간관찰세포형태,류식세포의검측세포주기화표면표기물,성지성골분화유도감정.MSCs경록갑기분갑선안형광염료(CM-DiI)표기후,형광현미경관찰형광표기정황,류식세포의검측표기솔,병통과회제생장곡선명학CM-DiI대MSCs생장증식적영향.결과 MSCs접충24~48 h후,첩벽세포다위원형、다각형、사형,전지제3대시형태정균일적장사형.제3대MSCs고표체CD44,저표체CD106,불표체CD11b、CD45,85%이상세포처우G0/G1기;성지성골유도분별경유홍O화천소홍염색균정양성.CM-DiI표기후형광현미경하세포정홍색형광,체외배양2주형광미견명현감약;류식세포술검측현시표기솔체95%이상,표기후세포생장증식불수영향.결론 통과전골수첩벽법급기확증후가획득대량순도교고적간충질간세포,CM-DiI표기시일충간단、은정、무독적세포표기방법.
