CAJ | 학술논문

对华支睾吸虫病流行地区人粪样进行华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)虫卵的鉴定、收集及DNA的提取,然后根据华支睾吸虫基因设计两对特异性引物,以粪便中提取的虫卵DNA为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)方法扩增目的基因片段,对PCR方法的各种反应条件进行优化.结果两对引物中以上游引物(5'-TGGCCTGACTGGCTGGCCGG-3')、下游引物(5'-CGGCACCCCACACACATACA-3')为最适引物,用PCR方法可扩增到分子量大小为255 bp的特异性条带,测序结果经BLAST工具进行分析,与中国沈阳分离株(AF217099)和朝鲜分离株(AF217094)的同源性为100％;50 μL PCR反应体系的最优化反应条件为:dNTP 2.6 μL;10×PCR Buffer(含Mg2+)4.0 μL;上下游引物各0.5 μL;DNA模板5.5 μL;Taq DNA聚合酶0.4 μL.扩增程序为:94℃预变性5min,94℃变性30 s,56℃退火l min,72℃延伸30 s,30个循环,72℃延伸5 min,4℃保存.试验成功对吉林地区人粪样中华支睾吸虫虫卵进行了鉴定,并建立了华支睾吸虫虫卵PCR检测方法,为从分子生物学角度检测华支睾吸虫病提供了理论依据.
대화지고흡충병류행지구인분양진행화지고흡충(Clonorchis sinensis)충란적감정、수집급DNA적제취,연후근거화지고흡충기인설계량대특이성인물,이분편중제취적충란DNA위모판,채용취합매련식반응(PCR)방법확증목적기인편단,대PCR방법적각충반응조건진행우화.결과량대인물중이상유인물(5'-TGGCCTGACTGGCTGGCCGG-3')、하유인물(5'-CGGCACCCCACACACATACA-3')위최괄인물,용PCR방법가확증도분자량대소위255 bp적특이성조대,측서결과경BLAST공구진행분석,여중국침양분리주(AF217099)화조선분리주(AF217094)적동원성위100％;50 μL PCR반응체계적최우화반응조건위:dNTP 2.6 μL;10×PCR Buffer(함Mg2+)4.0 μL;상하유인물각0.5 μL;DNA모판5.5 μL;Taq DNA취합매0.4 μL.확증정서위:94℃예변성5min,94℃변성30 s,56℃퇴화l min,72℃연신30 s,30개순배,72℃연신5 min,4℃보존.시험성공대길임지구인분양중화지고흡충충란진행료감정,병건립료화지고흡충충란PCR검측방법,위종분자생물학각도검측화지고흡충병제공료이론의거.