中国动物检疫
中國動物檢疫
중국동물검역
CHINA ANMAL QUARANTINE
2013年
2期
42-45
,共4页
王雷%凌红丽%王宏华%孙海新
王雷%凌紅麗%王宏華%孫海新
왕뢰%릉홍려%왕굉화%손해신
鸡α-干扰素%基因克隆%大肠杆菌%包涵体%活性
鷄α-榦擾素%基因剋隆%大腸桿菌%包涵體%活性
계α-간우소%기인극륭%대장간균%포함체%활성
根据GenBank中鸡IFN-α基因设计引物对,利用PCR技术克隆并测定了SPF鸡的IFN-α基因,再在成熟肽基因两侧设计一对引物,分别加入合适的酶切位点,将其亚克隆在表达载体pET上,转化BL21 (DE3)后用1PTG诱导表达,用SDS-PAGE电泳分析表达形式,结果为蛋白以包涵体形式表达.提取的包涵体用7 mol/L盐酸胍变性,利用胱氨酸一半胱氨酸再氧化法对包涵体变性液进行分段稀释法复性.细胞病变抑制法(CEF-VSV为基本检测系统)测定复性液的抗病毒活性不低于107.0U/mL.
根據GenBank中鷄IFN-α基因設計引物對,利用PCR技術剋隆併測定瞭SPF鷄的IFN-α基因,再在成熟肽基因兩側設計一對引物,分彆加入閤適的酶切位點,將其亞剋隆在錶達載體pET上,轉化BL21 (DE3)後用1PTG誘導錶達,用SDS-PAGE電泳分析錶達形式,結果為蛋白以包涵體形式錶達.提取的包涵體用7 mol/L鹽痠胍變性,利用胱氨痠一半胱氨痠再氧化法對包涵體變性液進行分段稀釋法複性.細胞病變抑製法(CEF-VSV為基本檢測繫統)測定複性液的抗病毒活性不低于107.0U/mL.
근거GenBank중계IFN-α기인설계인물대,이용PCR기술극륭병측정료SPF계적IFN-α기인,재재성숙태기인량측설계일대인물,분별가입합괄적매절위점,장기아극륭재표체재체pET상,전화BL21 (DE3)후용1PTG유도표체,용SDS-PAGE전영분석표체형식,결과위단백이포함체형식표체.제취적포함체용7 mol/L염산고변성,이용광안산일반광안산재양화법대포함체변성액진행분단희석법복성.세포병변억제법(CEF-VSV위기본검측계통)측정복성액적항병독활성불저우107.0U/mL.
