畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2013年
4期
535-542
,共8页
黄妙容%张献伟%刘德武%邹娴%帅亮%袁玉娟%朱财林%吴珍芳
黃妙容%張獻偉%劉德武%鄒嫻%帥亮%袁玉娟%硃財林%吳珍芳
황묘용%장헌위%류덕무%추한%수량%원옥연%주재림%오진방
双筛选标记%纤维素酶%2A%猪胎儿成纤维细胞
雙篩選標記%纖維素酶%2A%豬胎兒成纖維細胞
쌍사선표기%섬유소매%2A%저태인성섬유세포
旨在构建带有双筛选标记的纤维素酶基因的腮腺特异性表达载体,筛选稳定转染该载体的猪胎儿成纤维细胞系,为制备转纤维素酶基因的转基因克隆猪提供核供体细胞.采用SOE-PCR和PCR方法,分别扩增获得筛选标记基因NEO-T2A-EGFP序列和纤维素酶相关基因的融合序列SP-EGX-F2A-BGL1,构建腮腺特异性表达载体pPSP-SP-EGX-F2 A-BGL1-CMV-NEO-T2 A-EGFP,经PCR、酶切、测序鉴定正确后,通过脂质体转染猪胎儿成纤维细胞,利用G418抗性和绿色荧光蛋白进行稳定筛选,并利用PCR和Western blot进行检测.结果表明,成功构建了带双筛选标记的腮腺特异表达纤维素酶基因的表达载体,并获得稳定转染该载体的猪胎儿成纤维细胞系.该结果为生产腮腺特异表达纤维素酶的转基因克隆猪研究奠定基础.
旨在構建帶有雙篩選標記的纖維素酶基因的腮腺特異性錶達載體,篩選穩定轉染該載體的豬胎兒成纖維細胞繫,為製備轉纖維素酶基因的轉基因剋隆豬提供覈供體細胞.採用SOE-PCR和PCR方法,分彆擴增穫得篩選標記基因NEO-T2A-EGFP序列和纖維素酶相關基因的融閤序列SP-EGX-F2A-BGL1,構建腮腺特異性錶達載體pPSP-SP-EGX-F2 A-BGL1-CMV-NEO-T2 A-EGFP,經PCR、酶切、測序鑒定正確後,通過脂質體轉染豬胎兒成纖維細胞,利用G418抗性和綠色熒光蛋白進行穩定篩選,併利用PCR和Western blot進行檢測.結果錶明,成功構建瞭帶雙篩選標記的腮腺特異錶達纖維素酶基因的錶達載體,併穫得穩定轉染該載體的豬胎兒成纖維細胞繫.該結果為生產腮腺特異錶達纖維素酶的轉基因剋隆豬研究奠定基礎.
지재구건대유쌍사선표기적섬유소매기인적시선특이성표체재체,사선은정전염해재체적저태인성섬유세포계,위제비전섬유소매기인적전기인극륭저제공핵공체세포.채용SOE-PCR화PCR방법,분별확증획득사선표기기인NEO-T2A-EGFP서렬화섬유소매상관기인적융합서렬SP-EGX-F2A-BGL1,구건시선특이성표체재체pPSP-SP-EGX-F2 A-BGL1-CMV-NEO-T2 A-EGFP,경PCR、매절、측서감정정학후,통과지질체전염저태인성섬유세포,이용G418항성화록색형광단백진행은정사선,병이용PCR화Western blot진행검측.결과표명,성공구건료대쌍사선표기적시선특이표체섬유소매기인적표체재체,병획득은정전염해재체적저태인성섬유세포계.해결과위생산시선특이표체섬유소매적전기인극륭저연구전정기출.
