畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2013年
4期
635-641
,共7页
安磊%黄映雪%胡新德%张伟%闫宇华%陈树林%赵善廷
安磊%黃映雪%鬍新德%張偉%閆宇華%陳樹林%趙善廷
안뢰%황영설%호신덕%장위%염우화%진수림%조선정
Fyn%载体构建%突变体%生物活性
Fyn%載體構建%突變體%生物活性
Fyn%재체구건%돌변체%생물활성
旨在构建小鼠Fyn及其多种突变体真核表达载体,预测突变后的蛋白质二级结构和功能改变.克隆小鼠大脑皮质的Fyn基因,构建克隆质粒pMD18-T-Fynwt,经测序验证后,以pMD18-T-Fynwt为模板,针对不同突变位点设计引物,构建不同突变体克隆质粒并验证,将Fyn不同的突变体克隆至真核表达载体pCAG-MCS,构建真核表达载体pCAG-MCS-Fyn**,将表达载体转染细胞进行检测,并对其进行生物信息学分析.测序结果显示pMD18-T-Fynwt核苷酸序列正确率100％,突变体完全达到预期设计；pCAG-MCS-Fyn**转染细胞后Fyn**表达量明显升高(P＜0.01).结果表明,Fyn突变体蛋白质的二级结构与野型相比有很大改变,可能影响其生物活性.
旨在構建小鼠Fyn及其多種突變體真覈錶達載體,預測突變後的蛋白質二級結構和功能改變.剋隆小鼠大腦皮質的Fyn基因,構建剋隆質粒pMD18-T-Fynwt,經測序驗證後,以pMD18-T-Fynwt為模闆,針對不同突變位點設計引物,構建不同突變體剋隆質粒併驗證,將Fyn不同的突變體剋隆至真覈錶達載體pCAG-MCS,構建真覈錶達載體pCAG-MCS-Fyn**,將錶達載體轉染細胞進行檢測,併對其進行生物信息學分析.測序結果顯示pMD18-T-Fynwt覈苷痠序列正確率100％,突變體完全達到預期設計；pCAG-MCS-Fyn**轉染細胞後Fyn**錶達量明顯升高(P＜0.01).結果錶明,Fyn突變體蛋白質的二級結構與野型相比有很大改變,可能影響其生物活性.
지재구건소서Fyn급기다충돌변체진핵표체재체,예측돌변후적단백질이급결구화공능개변.극륭소서대뇌피질적Fyn기인,구건극륭질립pMD18-T-Fynwt,경측서험증후,이pMD18-T-Fynwt위모판,침대불동돌변위점설계인물,구건불동돌변체극륭질립병험증,장Fyn불동적돌변체극륭지진핵표체재체pCAG-MCS,구건진핵표체재체pCAG-MCS-Fyn**,장표체재체전염세포진행검측,병대기진행생물신식학분석.측서결과현시pMD18-T-Fynwt핵감산서렬정학솔100％,돌변체완전체도예기설계；pCAG-MCS-Fyn**전염세포후Fyn**표체량명현승고(P＜0.01).결과표명,Fyn돌변체단백질적이급결구여야형상비유흔대개변,가능영향기생물활성.
