温州医学院学报
溫州醫學院學報
온주의학원학보
JOURNAL OF WENZHOU MEDICAL COLLEGE
2013年
6期
351-354
,共4页
袁健东%郎俊哲%沈翠华%傅强
袁健東%郎俊哲%瀋翠華%傅彊
원건동%랑준철%침취화%부강
人神经营养素3%慢病毒载体%基因转染
人神經營養素3%慢病毒載體%基因轉染
인신경영양소3%만병독재체%기인전염
human neurotrophin-3%lentiviral vector%gene transfection
目的:构建携带人神经营养素3 (hNT3)基因的重组慢病毒表达载体.方法:通过双限制性内切酶消化和连接的方法构建pGC-E1-hNT3-EGFP质粒,将该质粒转化大肠杆菌DH5α,通过PCR、酶切、测序和对比验证hNT3,通过Lipofectamine 2000将pGC-E1-hNT3-EGFP、pHe1per 1.0和pHe1per 2.0三质粒系统共转染293T细胞包装病毒,经大量扩增后,应用实时定量PCR法鉴定和测定滴度.结果:克隆得到512 bp目的hNT3全长基因,经过PCR扩增、酶切鉴定、序列测定证实,hNT3基因成功克隆到慢病毒载体中,可实现hNT3基因的表达,且病毒滴度为5×107 TU/L.结论:成功构建表达人hNT3基因的慢病毒载体并能在293T细胞中扩增获得足够高的病毒滴度,可作为基因转染的有效工具在将来神经损伤修复实验研究中得到应用.
目的:構建攜帶人神經營養素3 (hNT3)基因的重組慢病毒錶達載體.方法:通過雙限製性內切酶消化和連接的方法構建pGC-E1-hNT3-EGFP質粒,將該質粒轉化大腸桿菌DH5α,通過PCR、酶切、測序和對比驗證hNT3,通過Lipofectamine 2000將pGC-E1-hNT3-EGFP、pHe1per 1.0和pHe1per 2.0三質粒繫統共轉染293T細胞包裝病毒,經大量擴增後,應用實時定量PCR法鑒定和測定滴度.結果:剋隆得到512 bp目的hNT3全長基因,經過PCR擴增、酶切鑒定、序列測定證實,hNT3基因成功剋隆到慢病毒載體中,可實現hNT3基因的錶達,且病毒滴度為5×107 TU/L.結論:成功構建錶達人hNT3基因的慢病毒載體併能在293T細胞中擴增穫得足夠高的病毒滴度,可作為基因轉染的有效工具在將來神經損傷脩複實驗研究中得到應用.
목적:구건휴대인신경영양소3 (hNT3)기인적중조만병독표체재체.방법:통과쌍한제성내절매소화화련접적방법구건pGC-E1-hNT3-EGFP질립,장해질립전화대장간균DH5α,통과PCR、매절、측서화대비험증hNT3,통과Lipofectamine 2000장pGC-E1-hNT3-EGFP、pHe1per 1.0화pHe1per 2.0삼질립계통공전염293T세포포장병독,경대량확증후,응용실시정량PCR법감정화측정적도.결과:극륭득도512 bp목적hNT3전장기인,경과PCR확증、매절감정、서렬측정증실,hNT3기인성공극륭도만병독재체중,가실현hNT3기인적표체,차병독적도위5×107 TU/L.결론:성공구건표체인hNT3기인적만병독재체병능재293T세포중확증획득족구고적병독적도,가작위기인전염적유효공구재장래신경손상수복실험연구중득도응용.
