动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2013年
4期
39-42
,共4页
冯晓辉%余远迪%任玉鹏%岳华%张斌
馮曉輝%餘遠迪%任玉鵬%嶽華%張斌
풍효휘%여원적%임옥붕%악화%장빈
副猪嗜血杆菌%RfaF基因%原核表达%抗原性
副豬嗜血桿菌%RfaF基因%原覈錶達%抗原性
부저기혈간균%RfaF기인%원핵표체%항원성
副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)RfaF基因编码脂多糖庚糖基转移酶Ⅱ,参与了细菌的黏附入侵和抗血清中补体杀菌作用.为了进一步研究庚糖基转移酶Ⅱ的功能,用原核表达系统表达H.parasuis RfaF基因.用特异性引物扩增H.parasuis SC096株血清4型RfaF基因,得到一条1 053 bp的片段,将其连接到pET-32a(+)载体上,构建重组表达质粒,并将其转化至DH5α感受态细胞中,经酶切、PCR和测序进行鉴定.测序正确后,提取重组质粒,转化至E.coli BL21 (DE3)感受态细胞中,并用IPTG进行诱导.将诱导产物进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果显示,H.parasuis RfaF基因可以在E.coli中表达,重组蛋白分子质量约为55 ku,与预期分子质量大小一致.Western blot分析表明,RfaF蛋白可以与H.parasuis血清4.型阳性高免血清产生特异性结合反应,具有良好的抗原性.本研究结果为深入探讨RafF基因的功能奠定了基础.
副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis)RfaF基因編碼脂多糖庚糖基轉移酶Ⅱ,參與瞭細菌的黏附入侵和抗血清中補體殺菌作用.為瞭進一步研究庚糖基轉移酶Ⅱ的功能,用原覈錶達繫統錶達H.parasuis RfaF基因.用特異性引物擴增H.parasuis SC096株血清4型RfaF基因,得到一條1 053 bp的片段,將其連接到pET-32a(+)載體上,構建重組錶達質粒,併將其轉化至DH5α感受態細胞中,經酶切、PCR和測序進行鑒定.測序正確後,提取重組質粒,轉化至E.coli BL21 (DE3)感受態細胞中,併用IPTG進行誘導.將誘導產物進行SDS-PAGE和Western blot分析.結果顯示,H.parasuis RfaF基因可以在E.coli中錶達,重組蛋白分子質量約為55 ku,與預期分子質量大小一緻.Western blot分析錶明,RfaF蛋白可以與H.parasuis血清4.型暘性高免血清產生特異性結閤反應,具有良好的抗原性.本研究結果為深入探討RafF基因的功能奠定瞭基礎.
부저기혈간균(Haemophilus parasuis)RfaF기인편마지다당경당기전이매Ⅱ,삼여료세균적점부입침화항혈청중보체살균작용.위료진일보연구경당기전이매Ⅱ적공능,용원핵표체계통표체H.parasuis RfaF기인.용특이성인물확증H.parasuis SC096주혈청4형RfaF기인,득도일조1 053 bp적편단,장기련접도pET-32a(+)재체상,구건중조표체질립,병장기전화지DH5α감수태세포중,경매절、PCR화측서진행감정.측서정학후,제취중조질립,전화지E.coli BL21 (DE3)감수태세포중,병용IPTG진행유도.장유도산물진행SDS-PAGE화Western blot분석.결과현시,H.parasuis RfaF기인가이재E.coli중표체,중조단백분자질량약위55 ku,여예기분자질량대소일치.Western blot분석표명,RfaF단백가이여H.parasuis혈청4.형양성고면혈청산생특이성결합반응,구유량호적항원성.본연구결과위심입탐토RafF기인적공능전정료기출.
