动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2013年
4期
4-8
,共5页
周慧英%程艺%孙磊磊%王雨%吉艺宽%任涛%琚春梅
週慧英%程藝%孫磊磊%王雨%吉藝寬%任濤%琚春梅
주혜영%정예%손뢰뢰%왕우%길예관%임도%거춘매
伪狂犬病病毒%EP0基因%GST标签%融合表达
偽狂犬病病毒%EP0基因%GST標籤%融閤錶達
위광견병병독%EP0기인%GST표첨%융합표체
为研究伪狂犬病病毒EP0蛋白与病毒粒子中其他蛋白的相互作用,应用PCR方法从伪狂犬病病毒基因组中扩增EP0基因的编码区并克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒pMD-EP0；用EcoR Ⅰ和NotⅠ双酶切pMDEP0,回收EP0基因,并将其亚克隆至pGEX-4T-1中,构建带有GST标签的重组质粒pGEX-EP0；重组质粒转化大肠埃希菌BL21 (DE3),经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE和Western blot检测其表达情况.结果表明,扩增到EP0基因的编码区序列大小为1 227 bp;重组表达菌经诱导后,EP0融合蛋白获得了表达,大小约71.4 ku,且能与伪狂犬病病毒EP0单克隆抗体发生特异性反应.该蛋白的成功表达为进一步研究EP0蛋白与宿主细胞及病毒粒子中其他蛋白的相互作用奠定了基础.
為研究偽狂犬病病毒EP0蛋白與病毒粒子中其他蛋白的相互作用,應用PCR方法從偽狂犬病病毒基因組中擴增EP0基因的編碼區併剋隆至pMD18-T載體,構建重組質粒pMD-EP0；用EcoR Ⅰ和NotⅠ雙酶切pMDEP0,迴收EP0基因,併將其亞剋隆至pGEX-4T-1中,構建帶有GST標籤的重組質粒pGEX-EP0；重組質粒轉化大腸埃希菌BL21 (DE3),經IPTG誘導後,通過SDS-PAGE和Western blot檢測其錶達情況.結果錶明,擴增到EP0基因的編碼區序列大小為1 227 bp;重組錶達菌經誘導後,EP0融閤蛋白穫得瞭錶達,大小約71.4 ku,且能與偽狂犬病病毒EP0單剋隆抗體髮生特異性反應.該蛋白的成功錶達為進一步研究EP0蛋白與宿主細胞及病毒粒子中其他蛋白的相互作用奠定瞭基礎.
위연구위광견병병독EP0단백여병독입자중기타단백적상호작용,응용PCR방법종위광견병병독기인조중확증EP0기인적편마구병극륭지pMD18-T재체,구건중조질립pMD-EP0；용EcoR Ⅰ화NotⅠ쌍매절pMDEP0,회수EP0기인,병장기아극륭지pGEX-4T-1중,구건대유GST표첨적중조질립pGEX-EP0；중조질립전화대장애희균BL21 (DE3),경IPTG유도후,통과SDS-PAGE화Western blot검측기표체정황.결과표명,확증도EP0기인적편마구서렬대소위1 227 bp;중조표체균경유도후,EP0융합단백획득료표체,대소약71.4 ku,차능여위광견병병독EP0단극륭항체발생특이성반응.해단백적성공표체위진일보연구EP0단백여숙주세포급병독입자중기타단백적상호작용전정료기출.
