林业科学
林業科學
임업과학
SCIENTIA SILVAE SINICAE
2013年
5期
121-127
,共7页
李思蒙%王永林%黄冬辉%田呈明
李思矇%王永林%黃鼕輝%田呈明
리사몽%왕영림%황동휘%전정명
杨树%炭疽菌%遗传转化%原生质体%绿色荧光蛋白
楊樹%炭疽菌%遺傳轉化%原生質體%綠色熒光蛋白
양수%탄저균%유전전화%원생질체%록색형광단백
poplar%Colletotrichum%genetic transformation%protoplast%GFP
以杨树炭疽病菌菌株C 1-5-2作为受体,通过PEG介导的原生质体转化法,将含有潮霉素B(hph)和GFP表达基因的质粒gGFP转入杨树炭疽病菌菌丝的原生质体中.幼嫩菌丝在0.7 mol·L-1 NaC1溶解的1％ Lysing enzyme酶解液的作用下酶解210 min可以得到108· mL-1的原生质体；在PEG介导下,通过含有潮霉素浓度为300μg·mL-1的PDA选择培养基筛选转化子,每微克DNA获得41个转化子的平均转化效率.对转化子进行PCR鉴定表明:hph基因和GFP基因已经整合到杨树炭疽病菌转化子基因组中,通过荧光显微镜观察到转化子可以发出清晰的绿色荧光,且转化子的潮霉素抗性和GFP表达性状可以稳定遗传.
以楊樹炭疽病菌菌株C 1-5-2作為受體,通過PEG介導的原生質體轉化法,將含有潮黴素B(hph)和GFP錶達基因的質粒gGFP轉入楊樹炭疽病菌菌絲的原生質體中.幼嫩菌絲在0.7 mol·L-1 NaC1溶解的1％ Lysing enzyme酶解液的作用下酶解210 min可以得到108· mL-1的原生質體；在PEG介導下,通過含有潮黴素濃度為300μg·mL-1的PDA選擇培養基篩選轉化子,每微剋DNA穫得41箇轉化子的平均轉化效率.對轉化子進行PCR鑒定錶明:hph基因和GFP基因已經整閤到楊樹炭疽病菌轉化子基因組中,通過熒光顯微鏡觀察到轉化子可以髮齣清晰的綠色熒光,且轉化子的潮黴素抗性和GFP錶達性狀可以穩定遺傳.
이양수탄저병균균주C 1-5-2작위수체,통과PEG개도적원생질체전화법,장함유조매소B(hph)화GFP표체기인적질립gGFP전입양수탄저병균균사적원생질체중.유눈균사재0.7 mol·L-1 NaC1용해적1％ Lysing enzyme매해액적작용하매해210 min가이득도108· mL-1적원생질체；재PEG개도하,통과함유조매소농도위300μg·mL-1적PDA선택배양기사선전화자,매미극DNA획득41개전화자적평균전화효솔.대전화자진행PCR감정표명:hph기인화GFP기인이경정합도양수탄저병균전화자기인조중,통과형광현미경관찰도전화자가이발출청석적록색형광,차전화자적조매소항성화GFP표체성상가이은정유전.
