西部医学
西部醫學
서부의학
MEDICAL JOURNAL OF WEST CHINA
2013年
6期
824-828
,共5页
李莎%刘冯欢%李明远%李燕%张菁%杨靖%丁娜娜%李婉宜%王保宁
李莎%劉馮歡%李明遠%李燕%張菁%楊靖%丁娜娜%李婉宜%王保寧
리사%류풍환%리명원%리연%장정%양정%정나나%리완의%왕보저
流感病毒%核蛋白%B细胞表位
流感病毒%覈蛋白%B細胞錶位
류감병독%핵단백%B세포표위
influenza virus%nucleoprotein%B cell epitopes
目的 构建甲型流感病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)的原核表达载体,诱导NP融合蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定；预测人NP蛋白的B细胞抗原表位.方法 以pcDNA3.1(+)/NP为模板,利用PCR方法扩增目的片段NP,再将此片段插入原核表达载体pET-32a(+),并进行PCR鉴定、酶切鉴定和测序鉴定,将鉴定正确的质粒转入表达菌Rosetta-gami(2)中,用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达,用SDS-PAGE和Western Blot检测表达产物.按Chou-Fasman和Gamier-Robson方法预测其编码蛋白的二级结构,采用Karplns-Schulz方法预测蛋白骨架区的柔韧性；用Kyte-Doolittle方法预测其亲水性,Emini方法预测蛋白质表面可能性及Jameson-Wolf方法预测抗原性指数.结果 成功构建了流感病毒核蛋白(NP)的原核表达载体,经SDS-PAGE检测NP蛋白得到了表达,Western Blot证明表达的重组蛋白具有免疫活性.在蛋白质第6～11、79～91、241～248和319～326区段附近很可能为B细胞表位优势区域.结论 流感病毒核蛋白的表达及B细胞表位的预测为流感病毒的快速诊断试剂的研发工作提供了基础.
目的 構建甲型流感病毒覈蛋白(nucleoprotein,NP)的原覈錶達載體,誘導NP融閤蛋白在大腸桿菌中的錶達與鑒定；預測人NP蛋白的B細胞抗原錶位.方法 以pcDNA3.1(+)/NP為模闆,利用PCR方法擴增目的片段NP,再將此片段插入原覈錶達載體pET-32a(+),併進行PCR鑒定、酶切鑒定和測序鑒定,將鑒定正確的質粒轉入錶達菌Rosetta-gami(2)中,用異丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導融閤蛋白的錶達,用SDS-PAGE和Western Blot檢測錶達產物.按Chou-Fasman和Gamier-Robson方法預測其編碼蛋白的二級結構,採用Karplns-Schulz方法預測蛋白骨架區的柔韌性；用Kyte-Doolittle方法預測其親水性,Emini方法預測蛋白質錶麵可能性及Jameson-Wolf方法預測抗原性指數.結果 成功構建瞭流感病毒覈蛋白(NP)的原覈錶達載體,經SDS-PAGE檢測NP蛋白得到瞭錶達,Western Blot證明錶達的重組蛋白具有免疫活性.在蛋白質第6～11、79～91、241～248和319～326區段附近很可能為B細胞錶位優勢區域.結論 流感病毒覈蛋白的錶達及B細胞錶位的預測為流感病毒的快速診斷試劑的研髮工作提供瞭基礎.
목적 구건갑형류감병독핵단백(nucleoprotein,NP)적원핵표체재체,유도NP융합단백재대장간균중적표체여감정；예측인NP단백적B세포항원표위.방법 이pcDNA3.1(+)/NP위모판,이용PCR방법확증목적편단NP,재장차편단삽입원핵표체재체pET-32a(+),병진행PCR감정、매절감정화측서감정,장감정정학적질립전입표체균Rosetta-gami(2)중,용이병기-D-류대반유당감(IPTG)유도융합단백적표체,용SDS-PAGE화Western Blot검측표체산물.안Chou-Fasman화Gamier-Robson방법예측기편마단백적이급결구,채용Karplns-Schulz방법예측단백골가구적유인성；용Kyte-Doolittle방법예측기친수성,Emini방법예측단백질표면가능성급Jameson-Wolf방법예측항원성지수.결과 성공구건료류감병독핵단백(NP)적원핵표체재체,경SDS-PAGE검측NP단백득도료표체,Western Blot증명표체적중조단백구유면역활성.재단백질제6～11、79～91、241～248화319～326구단부근흔가능위B세포표위우세구역.결론 류감병독핵단백적표체급B세포표위적예측위류감병독적쾌속진단시제적연발공작제공료기출.
