江苏大学学报（医学版）
江囌大學學報（醫學版）
강소대학학보（의학판）
JOURNAL OF JIANGSU UNIVERSITY (MEDICINE EDITION)
2013年
1期
12-16
,共5页
陈志红%赵媛媛%张守亮%林建扬%魏法星%朱伟
陳誌紅%趙媛媛%張守亮%林建颺%魏法星%硃偉
진지홍%조원원%장수량%림건양%위법성%주위
人OX40-IgG1融合基因%腺病毒载体%OX40/OX40L途径%HL-7702肝细胞%器官移植
人OX40-IgG1融閤基因%腺病毒載體%OX40/OX40L途徑%HL-7702肝細胞%器官移植
인OX40-IgG1융합기인%선병독재체%OX40/OX40L도경%HL-7702간세포%기관이식
human OX40-IgG1 fusion gene%adenovirus vector%OX40/OX40L way%HL-7702 liver cells%organ transplanting
目的:构建并鉴定含人OX40-IgG1融合基因的重组腺病毒载体,并感染人肝HL-7702细胞,筛选出最佳感染剂量并检测OX40Ig的表达情况,为进一步用于器官移植后的抗排斥治疗奠定基础.方法:根据基因库公布的人OX40和hlgGl Fc片断序列设计特定引物,通过聚合酶链反应扩增并鉴定后,酶切插入穿梭质粒pAdTrack-CMV中.随后与pAdeasy-1腺病毒质粒以氯化钙法共转化BJ5183感受态细胞,重组质粒经鉴定正确后,大量扩增为腺病毒载体.再经293A细胞包装、扩增并纯化后感染HL-7702肝细胞,筛选出最佳感染剂量,并采用间接免疫荧光法检测其中外源性OX40lg基因的表达,采用ELISA法测定肝HL-7702细胞上清中OX40Ig蛋白的含量.结果:转移质粒pTOX40Ig经酶切及测序鉴定正确.重组腺病毒质粒经酶切鉴定正确,并成功转染了293A细胞.得到的病毒液经纯化扩增后进一步感染肝HL-7702细胞,经筛选,10 MOI为最佳感染剂量,并且可以检测到OX40Ig目的基因及其蛋白的表达.结论:成功构建了重组腺病毒载体AdOX40Ig,并且可在肝细胞HL-7702中表达相应的目的基因及蛋白.
目的:構建併鑒定含人OX40-IgG1融閤基因的重組腺病毒載體,併感染人肝HL-7702細胞,篩選齣最佳感染劑量併檢測OX40Ig的錶達情況,為進一步用于器官移植後的抗排斥治療奠定基礎.方法:根據基因庫公佈的人OX40和hlgGl Fc片斷序列設計特定引物,通過聚閤酶鏈反應擴增併鑒定後,酶切插入穿梭質粒pAdTrack-CMV中.隨後與pAdeasy-1腺病毒質粒以氯化鈣法共轉化BJ5183感受態細胞,重組質粒經鑒定正確後,大量擴增為腺病毒載體.再經293A細胞包裝、擴增併純化後感染HL-7702肝細胞,篩選齣最佳感染劑量,併採用間接免疫熒光法檢測其中外源性OX40lg基因的錶達,採用ELISA法測定肝HL-7702細胞上清中OX40Ig蛋白的含量.結果:轉移質粒pTOX40Ig經酶切及測序鑒定正確.重組腺病毒質粒經酶切鑒定正確,併成功轉染瞭293A細胞.得到的病毒液經純化擴增後進一步感染肝HL-7702細胞,經篩選,10 MOI為最佳感染劑量,併且可以檢測到OX40Ig目的基因及其蛋白的錶達.結論:成功構建瞭重組腺病毒載體AdOX40Ig,併且可在肝細胞HL-7702中錶達相應的目的基因及蛋白.
목적:구건병감정함인OX40-IgG1융합기인적중조선병독재체,병감염인간HL-7702세포,사선출최가감염제량병검측OX40Ig적표체정황,위진일보용우기관이식후적항배척치료전정기출.방법:근거기인고공포적인OX40화hlgGl Fc편단서렬설계특정인물,통과취합매련반응확증병감정후,매절삽입천사질립pAdTrack-CMV중.수후여pAdeasy-1선병독질립이록화개법공전화BJ5183감수태세포,중조질립경감정정학후,대량확증위선병독재체.재경293A세포포장、확증병순화후감염HL-7702간세포,사선출최가감염제량,병채용간접면역형광법검측기중외원성OX40lg기인적표체,채용ELISA법측정간HL-7702세포상청중OX40Ig단백적함량.결과:전이질립pTOX40Ig경매절급측서감정정학.중조선병독질립경매절감정정학,병성공전염료293A세포.득도적병독액경순화확증후진일보감염간HL-7702세포,경사선,10 MOI위최가감염제량,병차가이검측도OX40Ig목적기인급기단백적표체.결론:성공구건료중조선병독재체AdOX40Ig,병차가재간세포HL-7702중표체상응적목적기인급단백.
