石河子大学学报（自然科学版）
石河子大學學報（自然科學版）
석하자대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHIHEZI UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)
2013年
2期
182-186
,共5页
肖红冉%王大伟%贺志锐%王鹏雁%倪伟%胡圣伟%陈创夫
肖紅冉%王大偉%賀誌銳%王鵬雁%倪偉%鬍聖偉%陳創伕
초홍염%왕대위%하지예%왕붕안%예위%호골위%진창부
猪α干扰素%BHK-21细胞%生物活性分析
豬α榦擾素%BHK-21細胞%生物活性分析
저α간우소%BHK-21세포%생물활성분석
为了构建猪α-干扰素(PoIFN-α)的真核表达系统,鉴定其生物学活性,分离猪的外周血淋巴细胞,提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增猪α-干扰素基因序列,克隆至pcDNA3.1(+)载体,并转染BHK-21细胞.通过G418筛选获得稳定转染的细胞株,采用real-time PCR及ELISA测定PoIFN-α基因在BHK-21细胞内的表达,利用淋巴细胞增值试验(MTT)检测表达蛋白的生物学活性.结果表明:稳定整合PoIFN-α基因的BHK-21细胞系其PoIFN-α mRNA的转录效率比阴性对照组提高1.52倍,蛋白表达量显著提高1.35倍.MTT试验表明真核表达PoIFN-α淋巴细胞增值活性与阴性对照组相比差异显著(P＜0.01),表明BHK-21细胞表达的PoIFN-α具有良好的生物学活性,为开发新型抗病毒制剂奠定基础.
為瞭構建豬α-榦擾素(PoIFN-α)的真覈錶達繫統,鑒定其生物學活性,分離豬的外週血淋巴細胞,提取總RNA,利用RT-PCR技術擴增豬α-榦擾素基因序列,剋隆至pcDNA3.1(+)載體,併轉染BHK-21細胞.通過G418篩選穫得穩定轉染的細胞株,採用real-time PCR及ELISA測定PoIFN-α基因在BHK-21細胞內的錶達,利用淋巴細胞增值試驗(MTT)檢測錶達蛋白的生物學活性.結果錶明:穩定整閤PoIFN-α基因的BHK-21細胞繫其PoIFN-α mRNA的轉錄效率比陰性對照組提高1.52倍,蛋白錶達量顯著提高1.35倍.MTT試驗錶明真覈錶達PoIFN-α淋巴細胞增值活性與陰性對照組相比差異顯著(P＜0.01),錶明BHK-21細胞錶達的PoIFN-α具有良好的生物學活性,為開髮新型抗病毒製劑奠定基礎.
위료구건저α-간우소(PoIFN-α)적진핵표체계통,감정기생물학활성,분리저적외주혈림파세포,제취총RNA,이용RT-PCR기술확증저α-간우소기인서렬,극륭지pcDNA3.1(+)재체,병전염BHK-21세포.통과G418사선획득은정전염적세포주,채용real-time PCR급ELISA측정PoIFN-α기인재BHK-21세포내적표체,이용림파세포증치시험(MTT)검측표체단백적생물학활성.결과표명:은정정합PoIFN-α기인적BHK-21세포계기PoIFN-α mRNA적전록효솔비음성대조조제고1.52배,단백표체량현저제고1.35배.MTT시험표명진핵표체PoIFN-α림파세포증치활성여음성대조조상비차이현저(P＜0.01),표명BHK-21세포표체적PoIFN-α구유량호적생물학활성,위개발신형항병독제제전정기출.
