国际药学研究杂志
國際藥學研究雜誌
국제약학연구잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF PHARMACEUTICAL RESEARCH
2013年
3期
344-349,364
,共7页
何椿鹏%华玲%杨小盼%万德有%李萌萌%王清清%陈方%董立厚%高新
何椿鵬%華玲%楊小盼%萬德有%李萌萌%王清清%陳方%董立厚%高新
하춘붕%화령%양소반%만덕유%리맹맹%왕청청%진방%동립후%고신
肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白%N-糖基化%2-氨基苯甲酰胺标记%LC-MS%ZIC-HILIC%糖型
腫瘤壞死因子受體-Fc融閤蛋白%N-糖基化%2-氨基苯甲酰胺標記%LC-MS%ZIC-HILIC%糖型
종류배사인자수체-Fc융합단백%N-당기화%2-안기분갑선알표기%LC-MS%ZIC-HILIC%당형
tumor necrosis factor receptor (TNFR)-Fc fusion protein%N-glycosylation%2-aminobenzamide labeled%LC-MS%ZIC-HILIC%saccharoascorbic
目的 建立基于LC-MS的N-糖基化修饰糖链的分析方法,并比较不同肿瘤坏死因子受体(TNFR)-Fc融合蛋白N-糖基化修饰差异.方法 用肽-N-糖苷酶F释放糖蛋白中的修饰糖链,有机溶剂沉淀蛋白后,利用还原胺化反应将2-氨基苯甲酰胺标记至糖链上,并通过亲水作用萃取柱除去过量标记试剂,所得糖链采用ZIC-HILIC亲水作用色谱柱结合离子阱质谱进行分析.以市售TNFR-Fc融合蛋白为标准品,优化影响标记效率的各种因素后,对A和B两种TNFR-Fc融合蛋白制品的N-糖基化修饰糖链进行了分析和比较.结果 TNFR-Fc融合蛋白A和B中的修饰糖链主要含有岩藻糖、末端唾液酸、末端半乳糖、末端N-乙酰葡糖胺等糖型,且末端唾液酸含量相近,但融合蛋白A的岩藻糖和末端N-乙酰基葡萄糖的含量显著高于融合蛋白B,而融合蛋白B末端半乳糖含量高于融合蛋白A.结论 成功建立了基于LC-MS的N-糖基化修饰糖链的分析方法,该方法可有效分析糖蛋白中的修饰糖链类型和含量比例,对于详细表征糖蛋白药物结构及性质具有参考价值,并为进一步研究糖基化对糖蛋白药物药理活性以及药代动力学研究奠定了良好基础.
目的 建立基于LC-MS的N-糖基化脩飾糖鏈的分析方法,併比較不同腫瘤壞死因子受體(TNFR)-Fc融閤蛋白N-糖基化脩飾差異.方法 用肽-N-糖苷酶F釋放糖蛋白中的脩飾糖鏈,有機溶劑沉澱蛋白後,利用還原胺化反應將2-氨基苯甲酰胺標記至糖鏈上,併通過親水作用萃取柱除去過量標記試劑,所得糖鏈採用ZIC-HILIC親水作用色譜柱結閤離子阱質譜進行分析.以市售TNFR-Fc融閤蛋白為標準品,優化影響標記效率的各種因素後,對A和B兩種TNFR-Fc融閤蛋白製品的N-糖基化脩飾糖鏈進行瞭分析和比較.結果 TNFR-Fc融閤蛋白A和B中的脩飾糖鏈主要含有巖藻糖、末耑唾液痠、末耑半乳糖、末耑N-乙酰葡糖胺等糖型,且末耑唾液痠含量相近,但融閤蛋白A的巖藻糖和末耑N-乙酰基葡萄糖的含量顯著高于融閤蛋白B,而融閤蛋白B末耑半乳糖含量高于融閤蛋白A.結論 成功建立瞭基于LC-MS的N-糖基化脩飾糖鏈的分析方法,該方法可有效分析糖蛋白中的脩飾糖鏈類型和含量比例,對于詳細錶徵糖蛋白藥物結構及性質具有參攷價值,併為進一步研究糖基化對糖蛋白藥物藥理活性以及藥代動力學研究奠定瞭良好基礎.
목적 건립기우LC-MS적N-당기화수식당련적분석방법,병비교불동종류배사인자수체(TNFR)-Fc융합단백N-당기화수식차이.방법 용태-N-당감매F석방당단백중적수식당련,유궤용제침정단백후,이용환원알화반응장2-안기분갑선알표기지당련상,병통과친수작용췌취주제거과량표기시제,소득당련채용ZIC-HILIC친수작용색보주결합리자정질보진행분석.이시수TNFR-Fc융합단백위표준품,우화영향표기효솔적각충인소후,대A화B량충TNFR-Fc융합단백제품적N-당기화수식당련진행료분석화비교.결과 TNFR-Fc융합단백A화B중적수식당련주요함유암조당、말단타액산、말단반유당、말단N-을선포당알등당형,차말단타액산함량상근,단융합단백A적암조당화말단N-을선기포도당적함량현저고우융합단백B,이융합단백B말단반유당함량고우융합단백A.결론 성공건립료기우LC-MS적N-당기화수식당련적분석방법,해방법가유효분석당단백중적수식당련류형화함량비례,대우상세표정당단백약물결구급성질구유삼고개치,병위진일보연구당기화대당단백약물약리활성이급약대동역학연구전정료량호기출.
