农业科学与技术（英文版）
農業科學與技術（英文版）
농업과학여기술（영문판）
AGRICULTURAL SCIENCE & TECHNOLOGY
2013年
5期
710-715
,共6页
刘茂军%祝永琴%冯志新%吴叙苏%邵国青
劉茂軍%祝永琴%馮誌新%吳敘囌%邵國青
류무군%축영금%풍지신%오서소%소국청
猪肺炎支原体%P97R1%毕赤酵母%间接ELISA
豬肺炎支原體%P97R1%畢赤酵母%間接ELISA
저폐염지원체%P97R1%필적효모%간접ELISA
Mycoplasma hyopneumoniae%P97R1%Pichia pastoris%Indirect ELISA method
[目的]研究猪肺炎支原体P97RI基因在毕赤酵母中的分泌表达及初步应用.[方法]根据Genbank中猪肺炎支原体P97R1基因序列设计1对特异性引物,通过PCR扩增出猪肺炎支原体特异性蛋白P97R1基因,克隆入酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-P97R1；PICZα-A-P97R1经Sac Ⅰ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株GS115；将PCR鉴定为阳性的酵母转化子经甲醇诱导分泌P97R1蛋白于发酵上清液中,并通过SDS-PAGE电泳以及Western-blotting对其进行鉴定.[结果] P97R1蛋白基因获得了分泌性表达,表达量达499μg/ml,而且具有良好的反应原性；同时用表达蛋白经过各项优化建立了猪肺炎支原体间接ELISA检测方法,经检测该方法具有良好的特异性和重复性.[结论]该研究为猪肺炎支原体免疫检测试剂盒和基因工程疫苗的研制奠定了基础.
[目的]研究豬肺炎支原體P97RI基因在畢赤酵母中的分泌錶達及初步應用.[方法]根據Genbank中豬肺炎支原體P97R1基因序列設計1對特異性引物,通過PCR擴增齣豬肺炎支原體特異性蛋白P97R1基因,剋隆入酵母錶達載體pPICZα-A,構建分泌型重組酵母錶達載體pPICZα-A-P97R1；PICZα-A-P97R1經Sac Ⅰ酶切線性化後電轉化導入畢赤酵母菌株GS115；將PCR鑒定為暘性的酵母轉化子經甲醇誘導分泌P97R1蛋白于髮酵上清液中,併通過SDS-PAGE電泳以及Western-blotting對其進行鑒定.[結果] P97R1蛋白基因穫得瞭分泌性錶達,錶達量達499μg/ml,而且具有良好的反應原性；同時用錶達蛋白經過各項優化建立瞭豬肺炎支原體間接ELISA檢測方法,經檢測該方法具有良好的特異性和重複性.[結論]該研究為豬肺炎支原體免疫檢測試劑盒和基因工程疫苗的研製奠定瞭基礎.
[목적]연구저폐염지원체P97RI기인재필적효모중적분비표체급초보응용.[방법]근거Genbank중저폐염지원체P97R1기인서렬설계1대특이성인물,통과PCR확증출저폐염지원체특이성단백P97R1기인,극륭입효모표체재체pPICZα-A,구건분비형중조효모표체재체pPICZα-A-P97R1；PICZα-A-P97R1경Sac Ⅰ매절선성화후전전화도입필적효모균주GS115；장PCR감정위양성적효모전화자경갑순유도분비P97R1단백우발효상청액중,병통과SDS-PAGE전영이급Western-blotting대기진행감정.[결과] P97R1단백기인획득료분비성표체,표체량체499μg/ml,이차구유량호적반응원성；동시용표체단백경과각항우화건립료저폐염지원체간접ELISA검측방법,경검측해방법구유량호적특이성화중복성.[결론]해연구위저폐염지원체면역검측시제합화기인공정역묘적연제전정료기출.
