广东农业科学
廣東農業科學
엄동농업과학
GUANGDONG AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
7期
130-135
,共6页
巴西龟%GLO%基因克隆%组织表达
巴西龜%GLO%基因剋隆%組織錶達
파서구%GLO%기인극륭%조직표체
采用SMARTTM RACE技术从巴西龟(Trachemys scripta)的肾脏组织中克隆了L-古洛糖酸内酯氧化酶(GLO)基因全长cDNA序列,其长度为1875 bp,5′UTR 251 bp,3′UTR 301 bp,ORF 1323 bp,编码440个氨基酸,分子量50.5 ku,理论等电点为6.51.氨基酸序列同源性分析结果表明:巴西龟与中华鳖同源性最高,相似度和一致性分别为95.7％和88％；其次为鸟类(红原鸡),分别为94.8％和85.9％；与高等哺乳类相似度和一致性达92.7％～87.4％和84.1％～78.4％；与鱼类较低,分别为88.9％～82.7％和73.9％～64.8％；与鸭嘴兽最低,分别为72.4％和64.2％.分子系统进化结果也表明巴西龟与中华鳖及鸟类(红原鸡)的GLO分子进化关系最近.从mRNA、蛋白及酶活性表达水平对巴西龟的6种不同组织(脑、脾、肝、肾、肌肉和肠)进行了组织表达差异分析,结果发现巴西龟GLO mRNA在肾脏和肌肉组织中均有转录,但Western-blot结果表明GLO蛋白只在龟的肾脏中表达,HPLC结果也显示仅肾脏中存在极显著的GLO酶活性.以上结果表明巴西龟GLO基因在进化中具有高度保守性,其表达具有组织特异性.
採用SMARTTM RACE技術從巴西龜(Trachemys scripta)的腎髒組織中剋隆瞭L-古洛糖痠內酯氧化酶(GLO)基因全長cDNA序列,其長度為1875 bp,5′UTR 251 bp,3′UTR 301 bp,ORF 1323 bp,編碼440箇氨基痠,分子量50.5 ku,理論等電點為6.51.氨基痠序列同源性分析結果錶明:巴西龜與中華鱉同源性最高,相似度和一緻性分彆為95.7％和88％；其次為鳥類(紅原鷄),分彆為94.8％和85.9％；與高等哺乳類相似度和一緻性達92.7％～87.4％和84.1％～78.4％；與魚類較低,分彆為88.9％～82.7％和73.9％～64.8％；與鴨嘴獸最低,分彆為72.4％和64.2％.分子繫統進化結果也錶明巴西龜與中華鱉及鳥類(紅原鷄)的GLO分子進化關繫最近.從mRNA、蛋白及酶活性錶達水平對巴西龜的6種不同組織(腦、脾、肝、腎、肌肉和腸)進行瞭組織錶達差異分析,結果髮現巴西龜GLO mRNA在腎髒和肌肉組織中均有轉錄,但Western-blot結果錶明GLO蛋白隻在龜的腎髒中錶達,HPLC結果也顯示僅腎髒中存在極顯著的GLO酶活性.以上結果錶明巴西龜GLO基因在進化中具有高度保守性,其錶達具有組織特異性.
채용SMARTTM RACE기술종파서구(Trachemys scripta)적신장조직중극륭료L-고락당산내지양화매(GLO)기인전장cDNA서렬,기장도위1875 bp,5′UTR 251 bp,3′UTR 301 bp,ORF 1323 bp,편마440개안기산,분자량50.5 ku,이론등전점위6.51.안기산서렬동원성분석결과표명:파서구여중화별동원성최고,상사도화일치성분별위95.7％화88％；기차위조류(홍원계),분별위94.8％화85.9％；여고등포유류상사도화일치성체92.7％～87.4％화84.1％～78.4％；여어류교저,분별위88.9％～82.7％화73.9％～64.8％；여압취수최저,분별위72.4％화64.2％.분자계통진화결과야표명파서구여중화별급조류(홍원계)적GLO분자진화관계최근.종mRNA、단백급매활성표체수평대파서구적6충불동조직(뇌、비、간、신、기육화장)진행료조직표체차이분석,결과발현파서구GLO mRNA재신장화기육조직중균유전록,단Western-blot결과표명GLO단백지재구적신장중표체,HPLC결과야현시부신장중존재겁현저적GLO매활성.이상결과표명파서구GLO기인재진화중구유고도보수성,기표체구유조직특이성.
