武汉科技大学学报（自然科学版）
武漢科技大學學報（自然科學版）
무한과기대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF WUHAN UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2013年
3期
219-224
,共6页
喻放%左振宇%杨忠华%周卫
喻放%左振宇%楊忠華%週衛
유방%좌진우%양충화%주위
glyA基因%丝氨酸羟甲基转移酶%基因工程%发酵产酶
glyA基因%絲氨痠羥甲基轉移酶%基因工程%髮酵產酶
glyA기인%사안산간갑기전이매%기인공정%발효산매
以E.coli AB90054基因组中DNA为模板,采用PCR方法扩增得到glyA基因,将该基因克隆到表达载体pET28a(+)中,转化表达菌株BL21 (DE3)后筛选阳性重组子,并对筛选所得高表达基因工程菌G16进行培养条件和表达条件的优化.结果表明,当培养条件为38℃、pH为7.0、转速为150 r/min时,基因工程菌的生长速度和菌液浓度最佳；当表达条件的诱导温度为30℃、诱导剂浓度为0.5 mmol/L、诱导时间为5h时,基因工程菌诱导目的蛋白表达效果最好.通过SDS-PAGE分析和酶活测定后发现,在优化条件下基因工程菌G16发酵产丝氨酸羟甲基转移酶能力占菌体总蛋白的60％左右,且蛋白活性正常.
以E.coli AB90054基因組中DNA為模闆,採用PCR方法擴增得到glyA基因,將該基因剋隆到錶達載體pET28a(+)中,轉化錶達菌株BL21 (DE3)後篩選暘性重組子,併對篩選所得高錶達基因工程菌G16進行培養條件和錶達條件的優化.結果錶明,噹培養條件為38℃、pH為7.0、轉速為150 r/min時,基因工程菌的生長速度和菌液濃度最佳；噹錶達條件的誘導溫度為30℃、誘導劑濃度為0.5 mmol/L、誘導時間為5h時,基因工程菌誘導目的蛋白錶達效果最好.通過SDS-PAGE分析和酶活測定後髮現,在優化條件下基因工程菌G16髮酵產絲氨痠羥甲基轉移酶能力佔菌體總蛋白的60％左右,且蛋白活性正常.
이E.coli AB90054기인조중DNA위모판,채용PCR방법확증득도glyA기인,장해기인극륭도표체재체pET28a(+)중,전화표체균주BL21 (DE3)후사선양성중조자,병대사선소득고표체기인공정균G16진행배양조건화표체조건적우화.결과표명,당배양조건위38℃、pH위7.0、전속위150 r/min시,기인공정균적생장속도화균액농도최가；당표체조건적유도온도위30℃、유도제농도위0.5 mmol/L、유도시간위5h시,기인공정균유도목적단백표체효과최호.통과SDS-PAGE분석화매활측정후발현,재우화조건하기인공정균G16발효산사안산간갑기전이매능력점균체총단백적60％좌우,차단백활성정상.
